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噬菌体淘选之后做ELISA没结果的问题
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| 我现在做的是用噬菌体展示技术直接淘选硫酸软骨素，以期得到与硫酸软骨素的结合肽以作进一步的实验。现在一共进行了5轮淘选（一般而言，3轮就够了）从洗脱物的滴度来看，有富集表现，但是也不算明显（1此方，2此方，2此方，3此方）。不过每轮扩增后的滴度都能在10的11此方级别。现在的问题是，用这样的淘选物去做ELISA，与对照相比没有结果。其中：1，硫酸软骨素是一个黏多糖，不太好包被，但是也有文献说明可以包被上去。2，做ELISA时都有阳性对照，所以可以排除手法问题。而我的问题是：1，为什么都是包被相同的分子，洗脱液及封阻液都相同，但是经淘选得出的洗脱物却不能通过ELISA检验？2,如果淘选出的是非特异性的，那么这些Phage是和什么结合了，是BSA封阻液还是就是96微孔板？3，如何解决现在的问题？谢谢各位大虾指导哈~ |
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limichuan
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