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why10000

金虫 (小有名气)

[求助] ELISA试剂盒使用

在试剂盒公司买了德国TSZ的定量测大豆球蛋白的ELISA试剂盒,但买回来测了发现以下一些问题:
1、把蛋白样品稀释了10的n次方,分别为10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7,将以上各稀释的蛋白样品进行检测,结果却都是接近的,没有太大的变化。通过福林酚法测得蛋白样品为6mg/mL,按10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7稀释后应该是0.6、0.06、0.006mg/mL、0.6、0.06、0.006ug/mL、0.6ng/mL,试剂盒标曲范围为:37.5~600ng/L,也就是0.0375~0.6ng/mL,那我稀释的样品应该在那个范围内,但所有的结果都很接近,(根据标曲计算)都在100ng/L左右,根本不像是被稀释的浓度。不知道怎么解释?
2、试剂盒标曲能做出来,而且有梯度的,但为什么我的样品测出这样的结果?
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追求新生活

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
楼主,貌似你稀释的蛋白样品溶液前六者浓度已经超过了浓度上限了,只有最后一个浓度符合,还是浓度上限,要用酶联免疫吸附,加入后充当待测抗原或抗体,应该都过量了吧。。。
业精于勤而荒于嬉,行成于思而毁于随。
2楼2013-10-19 09:55:14
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why10000

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 追求新生活 at 2013-10-19 09:55:14
楼主,貌似你稀释的蛋白样品溶液前六者浓度已经超过了浓度上限了,只有最后一个浓度符合,还是浓度上限,要用酶联免疫吸附,加入后充当待测抗原或抗体,应该都过量了吧。。。

那如果是过量的话,测得的吸光度应该会远大于标曲的最大吸光度啊,怎么还在标曲吸光度范围内呢?
3楼2013-10-19 11:05:34
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追求新生活

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
why10000: 金币+2, ★★★很有帮助, 解释还算合理 2014-03-18 14:25:02
应该不会,应该是接近0.6ng/mL浓度的吸光值才对啊,应为过量的待测抗原或抗体已经洗脱了
业精于勤而荒于嬉,行成于思而毁于随。
4楼2013-10-19 12:15:33
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追求新生活

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by why10000 at 2013-10-19 11:05:34
那如果是过量的话,测得的吸光度应该会远大于标曲的最大吸光度啊,怎么还在标曲吸光度范围内呢?...

应该不会,应该是接近0.6ng/mL浓度的吸光值才对啊,应为过量的待测抗原或抗体已经洗脱了
业精于勤而荒于嬉,行成于思而毁于随。
5楼2013-10-19 12:16:35
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