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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 抗体/Elisa » ELISA实验中，抗原和抗体的稀释液问题
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蓝默儿

金虫 (小有名气)

[求助] ELISA实验中，抗原和抗体的稀释液问题已有3人参与

想问下：进行抗原、抗体稀释时，是用PBS、PBST、还是封闭液（5%脱脂乳）进行？谢谢
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微笑，自信，加油
1楼2014-06-10 14:10:31
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逍潇

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我做ELISA用的1%BSA稀释抗原和抗体
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2楼2014-06-10 15:41:43
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小周

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
0.5%BSA 溶解在PBST中。BSA也可1%。
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3楼2014-06-10 22:04:02
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寂静之林

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
蓝默儿: 金币+2, ★有帮助 2014-06-11 08:55:28
其实，用PBS、PBST，甚至用封闭液（5%的脱脂奶粉）来稀释抗原抗体，都可以。
PBS，就是为抗原抗体反应提供合适的缓冲体系。至于加了吐温的PBS，这个我也有点费解，我的理解是：这可能是为了保证反应的特异性，避免抗原抗体与微孔板的非特异性结合，当然这只是本人猜想，我还没怎么验证过。不过确实是这两种液体都可以用来稀释抗原抗体。
然后，封闭液（5%脱脂奶粉），我想封闭液的缓冲体系也是pH7.2-7.8的PBS或者Tris-HCl，这样的缓冲体系也可以满足抗原抗体的反应了。而脱脂奶粉，或者其他网友说的BSA，这些可以提高抗原抗体的稳定性，特别是低浓度的抗原抗体。
所以，如果楼主每次实验的抗原抗体都是现配现用的话，那只要提供了合适的pH环境，哪种缓冲液都可以，但是如果需要长期保存的话，还是要用带BSA或者能保证抗原抗体稳定性的液体来稀释！
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4楼2014-06-10 22:16:05
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