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【求助/交流】求懂ELISA的帮帮忙
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redsky0123
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【求助/交流】求懂ELISA的帮帮忙
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我是做单抗的,最近刚开始摸索着做,其中有一步是要摸索ELISA的最佳封闭液。我知道过程 但是我不知道其中一些抗原抗体,阴性 阳性血清的包被及添加浓度,就是什么包被1000*这些和什么有关啊,有哪位懂得高手帮帮忙
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意兴阑珊
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2010-09-20 12:46:32
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我一般用10%的新生小牛血清,0.2mM的CBS配制的封闭液
,阴性对照是用PBS,阳性对照是血清稀释1500倍
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2010-09-20 14:34:29
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redsky0123
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Originally posted by
qiqilao
at 2010-09-20 14:34:29:
我一般用10%的新生小牛血清,0.2mM的CBS配制的封闭液
,阴性对照是用PBS,阳性对照是血清稀释1500倍
不是吧 你们不用摸索的吗?阴性对照怎么用pbs,不是应该用阴性血清的吗。
这个稀释倍数有没有什么说法的,难道1000倍或是2000倍不行吗
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意兴阑珊
3楼
2010-09-20 15:49:02
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dianaofyezi
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你可以用方针滴定的方法确定大致的OD值范围,从这个范围里面可以看到合适的稀释阳参和 阴参的比例。然后慢慢调整各个比例。
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52187644
4楼
2010-09-20 16:07:55
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三妹妹
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lstt09nk(金币+2):鼓励交流~ 2010-09-21 16:02:23
如果你只是用来做单抗的话,封闭条件没有太大的要求,你用脱脂奶粉就可以,单抗筛选要求效率,粗略的建方法看看细胞上清中有没有抗体就好了,抗体大量制备之后才用着来考虑优化条件,一般优化离子浓度,pH,包被条件,封闭条件等
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5楼
2010-09-20 16:56:03
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servia
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封闭的话我们用Casein,跟楼上说的脱脂牛奶差不多。酶稀用新生牛血清。这些不用很严格吧,一般都不影响。
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化学虫子钻入生物世界
6楼
2010-09-21 15:16:32
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redsky0123
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Originally posted by
servia
at 2010-09-21 15:16:32:
封闭的话我们用Casein,跟楼上说的脱脂牛奶差不多。酶稀用新生牛血清。这些不用很严格吧,一般都不影响。
哦 我们实验室把这个看得很重。真是实验室不一样,流程都不一样了
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意兴阑珊
7楼
2010-09-21 18:25:20
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