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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】求懂ELISA的帮帮忙
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redsky0123

木虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】求懂ELISA的帮帮忙 已有5人参与

我是做单抗的，最近刚开始摸索着做，其中有一步是要摸索ELISA的最佳封闭液。我知道过程 但是我不知道其中一些抗原抗体，阴性 阳性血清的包被及添加浓度，就是什么包被1000*这些和什么有关啊，有哪位懂得高手帮帮忙
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意兴阑珊
1楼 2010-09-20 12:46:32
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qiqilao

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我一般用10%的新生小牛血清，0.2mM的CBS配制的封闭液
，阴性对照是用PBS，阳性对照是血清稀释1500倍
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2楼2010-09-20 14:34:29
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redsky0123

木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by qiqilao at 2010-09-20 14:34:29:
我一般用10%的新生小牛血清，0.2mM的CBS配制的封闭液
，阴性对照是用PBS，阳性对照是血清稀释1500倍

不是吧 你们不用摸索的吗？阴性对照怎么用pbs，不是应该用阴性血清的吗。
这个稀释倍数有没有什么说法的，难道1000倍或是2000倍不行吗
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意兴阑珊
3楼2010-09-20 15:49:02
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dianaofyezi

金虫 (正式写手)
★
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你可以用方针滴定的方法确定大致的OD值范围，从这个范围里面可以看到合适的稀释阳参和 阴参的比例。然后慢慢调整各个比例。
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52187644
4楼2010-09-20 16:07:55
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三妹妹

金虫 (小有名气)
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lstt09nk(金币+2):鼓励交流~ 2010-09-21 16:02:23
如果你只是用来做单抗的话，封闭条件没有太大的要求，你用脱脂奶粉就可以，单抗筛选要求效率，粗略的建方法看看细胞上清中有没有抗体就好了，抗体大量制备之后才用着来考虑优化条件，一般优化离子浓度，pH，包被条件，封闭条件等
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5楼2010-09-20 16:56:03
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servia

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
封闭的话我们用Casein，跟楼上说的脱脂牛奶差不多。酶稀用新生牛血清。这些不用很严格吧，一般都不影响。
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化学虫子钻入生物世界
6楼2010-09-21 15:16:32
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redsky0123

木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by servia at 2010-09-21 15:16:32:
封闭的话我们用Casein，跟楼上说的脱脂牛奶差不多。酶稀用新生牛血清。这些不用很严格吧，一般都不影响。

哦 我们实验室把这个看得很重。真是实验室不一样，流程都不一样了
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意兴阑珊
7楼2010-09-21 18:25:20
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