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关于ELISA试剂盒的线性范围问题 已有3人参与
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最近在做ELISA试剂盒的定量，遇到了一些问题，在这和大家交流一下。望各位同仁不吝赐教！ 做定量要验证试剂盒的线性范围，目前我的盒子线性范围太窄——线性区间的高点与低点的浓度值比值为16。我尝试了改变反应模式，将线性范围略扩宽了一些——线性区间的高点与低点的浓度值比值为32。如果高点往上一个梯度延伸，则R平方就只有0.96（已经是最好的结果了）。总的来说线性范围还是太窄。我参考了其他一些厂家的ELISA定量试剂盒，基本上线性区间的高点与低点的浓度值比值都≥64。我知道,ELISA的信号值范围窄，但我想线性区间的高点与低点的浓度值比值≥64应该还是可以的。我想请教一下各位战友如何才能将试剂盒的线性范围扩宽？我搜索了论坛没有找到相关帖，那么就从这个帖子开始，我们一块讨论一下吧。 |
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线性范围的影响有两个因素：1、本身抗体的亲和力，亲和力越高灵敏度越高，高点与低点比值也就越高，若标准曲线的斜率接近于1，抗体亲和力还是可以的。比值没有相关规定说一定要高于64。 2、本身抗原的影响。不同的蛋白ELISA其灵敏度都不相同，线性范围也不同，如果你的项目在某一浓度达到平台值，说明这个蛋白与其抗体结合与解离在此浓度下达到了平衡，改变其他条件也无法增加，除非改用化学发光法。若是同一种蛋白其线性范围没有其他盒子做的高，可尝试改变条件降低其背景值从而降低低浓度来提高比值。 |
4楼2014-09-03 15:34:59