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514097567

铜虫 (初入文坛)

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[求助] 求助，LPS刺激RAW264.7用ELISA试剂盒检测TNF-α和IL-6怎么做已有2人参与

有人做过相关实验吗？看了好多文献，发现做的方法都不一样，细胞加板的时间，加药的剂量都不一样，救助~~

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1楼 2014-06-03 09:58:05

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逍潇

铁杆木虫 (著名写手)

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【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
514097567: 金币+1 2014-06-11 17:34:14

这个是要做优化的，首先控制接种细胞数量和药的浓度（你看文献一般用多少，我之前是用Con A刺激的），设定一系列刺激培养时间进行选择，一般24h, 48h, 72h三个梯度差不多了。确定好培养时间后，再选择接种细胞数量，细胞数量确实好了你再优化药的浓度。当然条件优化的顺序不必完全按照我说的来，原则就是先固定其它的因素，只变一个因素。

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2楼2014-06-03 13:24:12

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514097567

铜虫 (初入文坛)

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引用回帖:

2楼: Originally posted by 逍潇 at 2014-06-03 13:24:12
这个是要做优化的，首先控制接种细胞数量和药的浓度（你看文献一般用多少，我之前是用Con A刺激的），设定一系列刺激培养时间进行选择，一般24h, 48h, 72h三个梯度差不多了。确定好培养时间后，再选择接种细胞数量， ...

我想问一下，这个需要饥饿处理吗？我看文献，细胞是1.5×10^6, LPS浓度是1 μg/ml，有的文献说直接饥饿处理2个小时就行，但是有的说得过夜，我也搞不明白嘞

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3楼2014-06-03 15:00:37

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