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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 抗体/Elisa » 求助，LPS刺激RAW264.7用ELISA试剂盒检测TNF-α和IL-6怎么做
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514097567

铜虫 (初入文坛)

[求助] 求助，LPS刺激RAW264.7用ELISA试剂盒检测TNF-α和IL-6怎么做 已有2人参与

有人做过相关实验吗？看了好多文献，发现做的方法都不一样，细胞加板的时间，加药的剂量都不一样，救助~~
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1楼 2014-06-03 09:58:05
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逍潇

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
514097567: 金币+1 2014-06-11 17:34:14
这个是要做优化的，首先控制接种细胞数量和药的浓度（你看文献一般用多少，我之前是用Con A刺激的），设定一系列刺激培养时间进行选择，一般24h, 48h, 72h三个梯度差不多了。确定好培养时间后，再选择接种细胞数量，细胞数量确实好了你再优化药的浓度。当然条件优化的顺序不必完全按照我说的来，原则就是先固定其它的因素，只变一个因素。
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2楼2014-06-03 13:24:12
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514097567

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 逍潇 at 2014-06-03 13:24:12
这个是要做优化的，首先控制接种细胞数量和药的浓度（你看文献一般用多少，我之前是用Con A刺激的），设定一系列刺激培养时间进行选择，一般24h, 48h, 72h三个梯度差不多了。确定好培养时间后，再选择接种细胞数量， ...

我想问一下，这个需要饥饿处理吗？我看文献，细胞是1.5×10^6, LPS浓度是1 μg/ml，有的文献说直接饥饿处理2个小时就行，但是有的说得过夜，我也搞不明白嘞
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3楼2014-06-03 15:00:37
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逍潇

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 514097567 at 2014-06-03 15:00:37
我想问一下，这个需要饥饿处理吗？我看文献，细胞是1.5×10^6, LPS浓度是1 μg/ml，有的文献说直接饥饿处理2个小时就行，但是有的说得过夜，我也搞不明白嘞...

我做的时候没有做饥饿处理，细胞接板后直接加药刺激。你直接可以做个实验对比下，看饥饿处理与不饥饿处理的实验结果有什么差异。
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4楼2014-06-03 16:08:53
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梓汐

铁虫 (正式写手)
您好，请问您还有264.7细胞吗？能否赠予一些  我这里也有一些细胞株 （saos-2、293T、293w、3T3-1、3T3-L1 、HeLa ） 可以交换
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5楼2015-04-19 19:01:00
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尘封记忆92

新虫 (初入文坛)
我现在也在做同样的实验，想请问楼主后来找到合适的实验方法了么，加LPS刺激多久后测因子呢
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6楼2016-09-26 09:31:34
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chenweijlu

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

raw细胞选5-10代的最好，1×104/孔接96孔板，贴壁24h，就是过夜，LPS 1-2ul/ml，这个根据细胞状态可调，加药物刺激，6-48h可选，离心取上清，稀释或不稀释测细胞因子
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7楼2016-09-26 11:07:29
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chenweijlu

铜虫 (小有名气)
补充下 加LPS后一般是2H加药物
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8楼2016-09-26 11:08:58
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