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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 食品 » 实验室分析、仪器 » ELISA方法的准确性
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892001474

银虫 (小有名气)

[交流] ELISA方法的准确性

ELISA方法的准确性一般会用LC、LC-MS或者LC-MSMS做验证，因为我的方法涉及到小分子药物的衍生测定，所以液相的方法达不到回收率，请问有没有其他的方法可以用来验证ELISA方法的准确性呢？有没有这种可能：我的药物衍生体系本身这种方法与液相的流动相冲突，不适合用液相去测定？
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1楼 2013-09-01 15:03:58
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徐毅91

至尊木虫 (正式写手)
★
892001474(金币+1): 谢谢参与
同求

[ 发自小木虫客户端 ]
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6楼2013-09-01 17:07:48
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user59888

金虫 (文坛精英)
★
892001474(金币+1): 谢谢参与
呵呵

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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7楼2013-09-01 18:04:21
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luckybobozai

铁虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
有没有方法验证ELISA方法的精确性？？  
    像同一个样本，我做不同倍数稀释来测定，用同一个标准曲线求出的浓度有时相差很大，这个怎么能缩小呢？
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13楼2013-09-02 15:55:27
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zhangh62

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
通常用ELISA方法检验出来的阳性样品，需要用LC、LC-MS、GC-MS或者LC-MSMS做确证，因为ELISA方法的存在约5%左右的假阳性。究竟用上述的哪一种方法去确证其准确性，是要根据被测组分的理化性质决定的，例如组分在300度也不能够汽化，肯定不能用GC-MS；组分结构中有共轭，存在 n→π跃迁,π→π跃迁，一般会用HPLC紫外检测器；若组分具有荧光或者通过衍生化反应可以定量产生具有荧光的物质，则会用HPLC荧光检测器。以此类推，究竟用什么方法确证取决于被测组分的理化性质，而不是凭空想象！
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14楼2013-09-03 08:47:50
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892001474

银虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by zhangh62 at 2013-09-03 08:47:50
通常用ELISA方法检验出来的阳性样品，需要用LC、LC-MS、GC-MS或者LC-MSMS做确证，因为ELISA方法的存在约5%左右的假阳性。究竟用上述的哪一种方法去确证其准确性，是要根据被测组分的理化性质决定的，例如组分在300度 ...

谢谢，现在的问题是我按照理想的衍生条件去做衍生，用液相测不到，然后我往衍生液里添加标品还是测不到，一直找不到原因，所以考虑有没有除了仪器法之外还能验证ELISA的方法
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15楼2013-09-04 23:01:12
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zhangh62

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
15楼: Originally posted by 892001474 at 2013-09-04 23:01:12
谢谢，现在的问题是我按照理想的衍生条件去做衍生，用液相测不到，然后我往衍生液里添加标品还是测不到，一直找不到原因，所以考虑有没有除了仪器法之外还能验证ELISA的方法...

“现在的问题是我按照理想的衍生条件去做衍生，用液相测不到，然后我往衍生液里添加标品还是测不到”——这足以说明，您的衍生化反应条件不妥，根本就没有发生衍生化反应，肯定也就测不到了。
几年前，我研究羊肉中伊维菌素残留检测时，按照农业部的标准去做，就是没有现象！可以肯定您说的“理想的衍生条件”并不理想。
例如，当时伊维菌素用三氟乙酸酐作为衍生化试剂，但是配制三氟乙酸酐溶液的乙腈若是不做除水处理的话，由于乙腈本身带有5%的水分，该水分足以让三氟乙酸酐发生水解而失去衍生化的活性！其二，伊维菌素遇酸不稳定，若直接将三氟乙酸酐加入时，伊维菌素会发生酸解，同样无法正常发生衍生化反应，所以在加入三氟乙酸酐溶液之前需要将体系干燥除水，再加入有机弱碱性保护剂氮甲基咪唑或DMF保护，衍生化才会有顺利完成的条件；且衍生化反应需要加热，可是，热稳定性试验结果告诉我，伊维菌素在65度以上开始发生热分解反应，因此，衍生化反应温度可以控制在50-55度，满足如上条件后，衍生化就成功啦！仔细研究一下您的“理想的衍生条件”哦？
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16楼2013-09-05 08:55:14
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892001474

银虫 (小有名气)
引用回帖:
16楼: Originally posted by zhangh62 at 2013-09-05 08:55:14
“现在的问题是我按照理想的衍生条件去做衍生，用液相测不到，然后我往衍生液里添加标品还是测不到”——这足以说明，您的衍生化反应条件不妥，根本就没有发生衍生化反应，肯定也就测不到了。
几年前，我研究羊肉 ...

嗯，我的衍生反应就是用氯仿溶解原药，加入过量水合肼，直接反应就OK，这是按照当初药物合成的步骤操作的，大量的反应是可行的，但是现在换成微量就出问题了，我也觉得是衍生化过程出现问题，但是一直找不到原因，导师说也有可能是流动相的条件（乙腈+水+磷酸）与衍生体系互相干扰，是不是需要重新在摸索药物出峰条件？目前这个条件跑标品是能跑出特征峰的。我试了试把当初大量合成的衍生药物添加到水合肼中上液相发现没有药物特征峰，前两天微量反应了一下跑了一下板，只有一个产物点（水合肼因为极性太大点板是跑不出来的）我刮下来用甲醇溶解了去打质谱看看最后到底反应生成什么物质。
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17楼2013-09-07 15:40:00
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zhangh62

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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17楼: Originally posted by 892001474 at 2013-09-07 15:40:00
嗯，我的衍生反应就是用氯仿溶解原药，加入过量水合肼，直接反应就OK，这是按照当初药物合成的步骤操作的，大量的反应是可行的，但是现在换成微量就出问题了，我也觉得是衍生化过程出现问题，但是一直找不到原因， ...

遇到这种问题，通常不要简单滴重复试验，此刻最需要冷静思考，找到问题的症结所在，有针对性地自己设计3-5个试验方案，将不同的衍生化条件同时进行探索，逐步缩小范围，通常尝试3次左右就把所有可能影响衍生化的因素逐一排除，就可以解决问题了！祝您顺利！
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892001474
18楼2013-09-08 09:47:50
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892001474

银虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
18楼: Originally posted by zhangh62 at 2013-09-08 09:47:50
遇到这种问题，通常不要简单滴重复试验，此刻最需要冷静思考，找到问题的症结所在，有针对性地自己设计3-5个试验方案，将不同的衍生化条件同时进行探索，逐步缩小范围，通常尝试3次左右就把所有可能影响衍生化的因 ...

谢谢
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19楼2013-09-08 10:39:44
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readytogo2楼
2013-09-01 15:19   回复  
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haixiawu3楼
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黄山松504楼
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yingying15885楼
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spbee8楼
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ge09169楼
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沧__海10楼
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^enjoy^11楼
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bravelion12楼
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