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marcosun木虫 (正式写手)
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[求助]
求助cell based ELISA的方法和应用
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学化学的，突然要考生物。简答cell based ELISA的方法和应用。。。 求大神 |
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 【分子生物】EPI帖 |
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sunxiang1221
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【答案】应助回帖
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marcosun: 回帖置顶 2013-01-06 10:10:42
小丹木木: 金币+5, MolEPI+1, 热心，专业 2013-01-06 11:29:05
marcosun: 金币+5 2013-01-07 00:06:02
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cell ELISA（酶联免疫吸附试验）是用细胞代替可溶性抗原包被于96 孔酶联板（或细胞培养板）进行免疫学检测的一种有效方法，该方法特别适用于抗原位于细胞膜上而相应抗原的特性又不十分清楚或抗原难于纯化等情况。 1、原理： ELISA的原理是使第一抗体结合到某种固相载体表面，同时用酶标记第二抗体，在测定时，把受检标本、固相载体抗体和酶标二抗按不同的步骤与起反应，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例，加入酶反应底物，底物被酶催化生色且与受检标本量相关，以此定性定量。 Cell ELISA的原理是用细胞代替了固相载体和受检可溶性抗原，基于ELISA原理测定细胞表面特定的分子。而今年以此衍生出多种模式的细胞-ELISA。 2、与普通ELISA区别： 普通ELISA CELL ELISA 包被物质 可溶性抗原（或抗体） 受检的细胞悬液 常用标记酶 HRP、ALP β-gal 目的 检测可溶性抗原、抗体 测定细胞表面表达的特定分子、评定细胞功能 3、基本步骤为：制备受检细胞悬液-----将其置于96孔板小孔内------加第一抗体------温育洗涤后-----加第二抗体-----温育洗涤----加底物液------显色------判断结果。 4、要点：细胞包被和96孔板洗涤，抗体选择，标记酶的选择，抗体-酶结合复合物的制备 5、优点 用以检测粘附细胞表面抗原优于流式细胞仪，可测定粘附细胞表达的任何表面分子，还可检测非粘附细胞。快速、方便、敏感性很高、可大量测定细胞表面分子表达。 6、应用 主要用于测定细胞表面特定的分子。 ①疾病的诊断和鉴别诊断：如采用cell ELISA鉴别结核性脑膜炎（TBM）和经不完全治疗后的化脓性脑膜炎（PTPM），利用的是TBM患者脑脊液中存在一种30000蛋白抗原，可以被B淋巴细胞可以对此蛋白产生应答，PTPM则无此类反应。 ②药物疗效的考核：用细胞ELISA研究pravastatin对内皮细胞活化的作用；用细胞ELISA和逆转录酶联反应观察ICAM-1的表达以探讨药物ISA的作用；ELISA测定糖皮质激素地塞米松作用后内皮细胞产生血管细胞粘附分子(VCAM-1)和ICAM-1的水平。 ③发病机制的研究：全细胞细菌-ELISA测定COPD患者的抗H.influenzae抗体，研究COPD加剧与对influenzae应答的关系。 ④方法学比较 希望对你有用！ |
3楼2013-01-06 09:36:43
zhang881007
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2楼2013-01-04 15:42:53
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cell ELISA（酶联免疫吸附试验）是用细胞代替可溶性抗原包被于96 孔酶联板（或细胞培养板）进行免疫学检测的一种有效方法，该方法特别适用于抗原位于细胞膜上而相应抗原的特性又不十分清楚或抗原难于纯化等情况。 1、原理： ELISA的原理是使第一抗体结合到某种固相载体表面，同时用酶标记第二抗体，在测定时，把受检标本、固相载体抗体和酶标二抗按不同的步骤与起反应，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例，加入酶反应底物，底物被酶催化生色且与受检标本量相关，以此定性定量。 Cell ELISA的原理是用细胞代替了固相载体和受检可溶性抗原，基于ELISA原理测定细胞表面特定的分子。而今年以此衍生出多种模式的细胞-ELISA。 2、与普通ELISA区别： 普通ELISA CELL ELISA 包被物质 可溶性抗原（或抗体） 受检的细胞悬液 常用标记酶 HRP、ALP β-gal 目的 检测可溶性抗原、抗体 测定细胞表面表达的特定分子、评定细胞功能 3、基本步骤为：制备受检细胞悬液-----将其置于96孔板小孔内------加第一抗体------温育洗涤后-----加第二抗体-----温育洗涤----加底物液------显色------判断结果。 4、要点：细胞包被和96孔板洗涤，抗体选择，标记酶的选择，抗体-酶结合复合物的制备 5、优点 用以检测粘附细胞表面抗原优于流式细胞仪，可测定粘附细胞表达的任何表面分子，还可检测非粘附细胞。快速、方便、敏感性很高、可大量测定细胞表面分子表达。 6、应用 主要用于测定细胞表面特定的分子。 ①疾病的诊断和鉴别诊断：如采用cell ELISA鉴别结核性脑膜炎（TBM）和经不完全治疗后的化脓性脑膜炎（PTPM），利用的是TBM患者脑脊液中存在一种30000蛋白抗原，可以被B淋巴细胞可以对此蛋白产生应答，PTPM则无此类反应。 ②药物疗效的考核：用细胞ELISA研究pravastatin对内皮细胞活化的作用；用细胞ELISA和逆转录酶联反应观察ICAM-1的表达以探讨药物ISA的作用；ELISA测定糖皮质激素地塞米松作用后内皮细胞产生血管细胞粘附分子(VCAM-1)和ICAM-1的水平。 ③发病机制的研究：全细胞细菌-ELISA测定COPD患者的抗H.influenzae抗体，研究COPD加剧与对influenzae应答的关系。 ④方法学比较 |
4楼2013-01-06 09:45:11
