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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 抗体/Elisa » 小鼠ELISA和流式细胞实验问题求助
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呀咦呦

新虫 (初入文坛)

[求助] 小鼠ELISA和流式细胞实验问题求助 已有2人参与

我在做小鼠免疫试验，现在要测ELISA，想测血清中的γ干扰素和介素4，进口试剂盒太贵了，现在不知道是选国产的还是进口分装的？进口分装的靠谱吗？还有就是现在要做流式细胞，测小鼠脾脏CD4+和CD8+细胞，处于完全不懂状态，有哪位大师做过能指点指点些问题啊？不胜感激
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1楼 2014-09-05 13:57:01
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berniehuang

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
进口分装的肯定有问题，强烈建议不要买。
要么用进口原装，要么用品质好的国产试剂盒。
可以问一下联科生物，有ELISA代测。脾细胞的CD4和CD8只要买两个不同荧光素标记的抗体就可以了，严谨一点就再买相应的同型对照即可。流式操作也很简单，做流式的老师应该都会。
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2楼2014-09-05 15:37:57
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呀咦呦

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by berniehuang at 2014-09-05 15:37:57
进口分装的肯定有问题，强烈建议不要买。
要么用进口原装，要么用品质好的国产试剂盒。
可以问一下联科生物，有ELISA代测。脾细胞的CD4和CD8只要买两个不同荧光素标记的抗体就可以了，严谨一点就再买相应的同型对 ...

哦，我看进口分装和国产的价格差不多，还以为都行呢，就怕买国产的不好也那样。我现在只知道是要买两个荧光素标记的抗体，可是具体的操作步骤还有要加的量都不清楚，能请您帮我提供下资料吗？还有这个上流式的条件是固定的吗？
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3楼2014-09-06 19:38:02
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berniehuang

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 呀咦呦 at 2014-09-06 19:38:02
哦，我看进口分装和国产的价格差不多，还以为都行呢，就怕买国产的不好也那样。我现在只知道是要买两个荧光素标记的抗体，可是具体的操作步骤还有要加的量都不清楚，能请您帮我提供下资料吗？还有这个上流式的条件 ...

楼主买国产试剂盒的时候，可以先看一下他们的说明书，如果像回收率(recovery)、稀释线性、灵敏度、CV值、样本值等等性能参数都没有的话，就要小心可能是假货或劣质产品了。
CD4和CD8就选FITC和PE荧光素即可，不过需要调一下补偿。如果不想调补偿的话，可以选择检测通道较远的FITC和APC。加的量要看说明书的，不同厂家的加的量也不一样。上流式检测需要调节电压、补偿，有一定的人为因素，如果把第一次的方案保存下来的话，以后相同的样本和相同的荧光标记就可以直接调用，有时候可能需要微调一下。
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4楼2014-09-07 19:51:03
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呀咦呦

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by berniehuang at 2014-09-07 19:51:03
楼主买国产试剂盒的时候，可以先看一下他们的说明书，如果像回收率(recovery)、稀释线性、灵敏度、CV值、样本值等等性能参数都没有的话，就要小心可能是假货或劣质产品了。
CD4和CD8就选FITC和PE荧光素即可，不过 ...

谢谢您。我是不太会，实验大体方案是一个老师给出的，但是具体操作有很多问题，理论知识也欠缺，自己看一些文献也都有出入，还没最后确定怎么做。请问您那我是不是还需要买CD3抗体，什么荧光素标记的呢
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5楼2014-09-10 09:40:21
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berniehuang

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 呀咦呦 at 2014-09-10 09:40:21
谢谢您。我是不太会，实验大体方案是一个老师给出的，但是具体操作有很多问题，理论知识也欠缺，自己看一些文献也都有出入，还没最后确定怎么做。请问您那我是不是还需要买CD3抗体，什么荧光素标记的呢...

小鼠的还好，不过要是为了更加严谨一点，可以再加个CD3。常用的三色就是FITC、PE、APC，调补偿也容易的。
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6楼2014-09-10 11:09:54
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biotech_zhou

木虫 (著名写手)

待人以诚：专业/专注/专心

【答案】应助回帖

山雨欲来风满楼啊
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年末优惠荧光定量pcr、WB、ELISA技术服务一律六折！交流锤炼知识，用心构筑桥梁，以更优质的产品及技术服务助力科研；QQ：2513165427；Email：b
7楼2014-09-15 11:43:58
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laikete

银虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by berniehuang at 2014-09-10 11:09:54
小鼠的还好，不过要是为了更加严谨一点，可以再加个CD3。常用的三色就是FITC、PE、APC，调补偿也容易的。...

首先你得确定他的流式仪器有几根laser...
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如果梦的尽头有美丽的期待
8楼2014-09-17 09:27:40
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berniehuang

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

内容已删除
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9楼2014-09-18 08:28:06
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