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呀咦呦

新虫 (初入文坛)

[求助] 小鼠ELISA和流式细胞实验问题求助 已有2人参与

我在做小鼠免疫试验,现在要测ELISA,想测血清中的γ干扰素和介素4,进口试剂盒太贵了,现在不知道是选国产的还是进口分装的?进口分装的靠谱吗?还有就是现在要做流式细胞,测小鼠脾脏CD4+和CD8+细胞,处于完全不懂状态,有哪位大师做过能指点指点些问题啊?不胜感激
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berniehuang

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
进口分装的肯定有问题,强烈建议不要买。
要么用进口原装,要么用品质好的国产试剂盒。
可以问一下联科生物,有ELISA代测。脾细胞的CD4和CD8只要买两个不同荧光素标记的抗体就可以了,严谨一点就再买相应的同型对照即可。流式操作也很简单,做流式的老师应该都会。
2楼2014-09-05 15:37:57
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呀咦呦

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by berniehuang at 2014-09-05 15:37:57
进口分装的肯定有问题,强烈建议不要买。
要么用进口原装,要么用品质好的国产试剂盒。
可以问一下联科生物,有ELISA代测。脾细胞的CD4和CD8只要买两个不同荧光素标记的抗体就可以了,严谨一点就再买相应的同型对 ...

哦,我看进口分装和国产的价格差不多,还以为都行呢,就怕买国产的不好也那样。我现在只知道是要买两个荧光素标记的抗体,可是具体的操作步骤还有要加的量都不清楚,能请您帮我提供下资料吗?还有这个上流式的条件是固定的吗?
3楼2014-09-06 19:38:02
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berniehuang

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 呀咦呦 at 2014-09-06 19:38:02
哦,我看进口分装和国产的价格差不多,还以为都行呢,就怕买国产的不好也那样。我现在只知道是要买两个荧光素标记的抗体,可是具体的操作步骤还有要加的量都不清楚,能请您帮我提供下资料吗?还有这个上流式的条件 ...

楼主买国产试剂盒的时候,可以先看一下他们的说明书,如果像回收率(recovery)、稀释线性、灵敏度、CV值、样本值等等性能参数都没有的话,就要小心可能是假货或劣质产品了。
CD4和CD8就选FITC和PE荧光素即可,不过需要调一下补偿。如果不想调补偿的话,可以选择检测通道较远的FITC和APC。加的量要看说明书的,不同厂家的加的量也不一样。上流式检测需要调节电压、补偿,有一定的人为因素,如果把第一次的方案保存下来的话,以后相同的样本和相同的荧光标记就可以直接调用,有时候可能需要微调一下。
4楼2014-09-07 19:51:03
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呀咦呦

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by berniehuang at 2014-09-07 19:51:03
楼主买国产试剂盒的时候,可以先看一下他们的说明书,如果像回收率(recovery)、稀释线性、灵敏度、CV值、样本值等等性能参数都没有的话,就要小心可能是假货或劣质产品了。
CD4和CD8就选FITC和PE荧光素即可,不过 ...

谢谢您。我是不太会,实验大体方案是一个老师给出的,但是具体操作有很多问题,理论知识也欠缺,自己看一些文献也都有出入,还没最后确定怎么做。请问您那我是不是还需要买CD3抗体,什么荧光素标记的呢
5楼2014-09-10 09:40:21
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berniehuang

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 呀咦呦 at 2014-09-10 09:40:21
谢谢您。我是不太会,实验大体方案是一个老师给出的,但是具体操作有很多问题,理论知识也欠缺,自己看一些文献也都有出入,还没最后确定怎么做。请问您那我是不是还需要买CD3抗体,什么荧光素标记的呢...

小鼠的还好,不过要是为了更加严谨一点,可以再加个CD3。常用的三色就是FITC、PE、APC,调补偿也容易的。
6楼2014-09-10 11:09:54
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biotech_zhou

木虫 (著名写手)

待人以诚:专业/专注/专心

【答案】应助回帖

山雨欲来风满楼啊
年末优惠荧光定量pcr、WB、ELISA技术服务一律六折!交流锤炼知识,用心构筑桥梁,以更优质的产品及技术服务助力科研;QQ:2513165427;Email:b
7楼2014-09-15 11:43:58
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laikete

银虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by berniehuang at 2014-09-10 11:09:54
小鼠的还好,不过要是为了更加严谨一点,可以再加个CD3。常用的三色就是FITC、PE、APC,调补偿也容易的。...

首先你得确定他的流式仪器有几根laser...
如果梦的尽头有美丽的期待
8楼2014-09-17 09:27:40
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berniehuang

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

内容已删除
9楼2014-09-18 08:28:06
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