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892001474

银虫 (小有名气)

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[交流] ELISA方法的准确性

ELISA方法的准确性一般会用LC、LC-MS或者LC-MSMS做验证，因为我的方法涉及到小分子药物的衍生测定，所以液相的方法达不到回收率，请问有没有其他的方法可以用来验证ELISA方法的准确性呢？有没有这种可能：我的药物衍生体系本身这种方法与液相的流动相冲突，不适合用液相去测定？

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1楼 2013-09-01 15:03:58

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892001474

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引用回帖:

16楼: Originally posted by zhangh62 at 2013-09-05 08:55:14
“现在的问题是我按照理想的衍生条件去做衍生，用液相测不到，然后我往衍生液里添加标品还是测不到”——这足以说明，您的衍生化反应条件不妥，根本就没有发生衍生化反应，肯定也就测不到了。
几年前，我研究羊肉 ...

嗯，我的衍生反应就是用氯仿溶解原药，加入过量水合肼，直接反应就OK，这是按照当初药物合成的步骤操作的，大量的反应是可行的，但是现在换成微量就出问题了，我也觉得是衍生化过程出现问题，但是一直找不到原因，导师说也有可能是流动相的条件（乙腈+水+磷酸）与衍生体系互相干扰，是不是需要重新在摸索药物出峰条件？目前这个条件跑标品是能跑出特征峰的。我试了试把当初大量合成的衍生药物添加到水合肼中上液相发现没有药物特征峰，前两天微量反应了一下跑了一下板，只有一个产物点（水合肼因为极性太大点板是跑不出来的）我刮下来用甲醇溶解了去打质谱看看最后到底反应生成什么物质。