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892001474

银虫 (小有名气)

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[交流] ELISA方法的准确性

ELISA方法的准确性一般会用LC、LC-MS或者LC-MSMS做验证，因为我的方法涉及到小分子药物的衍生测定，所以液相的方法达不到回收率，请问有没有其他的方法可以用来验证ELISA方法的准确性呢？有没有这种可能：我的药物衍生体系本身这种方法与液相的流动相冲突，不适合用液相去测定？

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1楼 2013-09-01 15:03:58

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zhangh62

木虫 (著名写手)

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引用回帖:

15楼: Originally posted by 892001474 at 2013-09-04 23:01:12
谢谢，现在的问题是我按照理想的衍生条件去做衍生，用液相测不到，然后我往衍生液里添加标品还是测不到，一直找不到原因，所以考虑有没有除了仪器法之外还能验证ELISA的方法...

“现在的问题是我按照理想的衍生条件去做衍生，用液相测不到，然后我往衍生液里添加标品还是测不到”——这足以说明，您的衍生化反应条件不妥，根本就没有发生衍生化反应，肯定也就测不到了。
几年前，我研究羊肉中伊维菌素残留检测时，按照农业部的标准去做，就是没有现象！可以肯定您说的“理想的衍生条件”并不理想。
例如，当时伊维菌素用三氟乙酸酐作为衍生化试剂，但是配制三氟乙酸酐溶液的乙腈若是不做除水处理的话，由于乙腈本身带有5%的水分，该水分足以让三氟乙酸酐发生水解而失去衍生化的活性！其二，伊维菌素遇酸不稳定，若直接将三氟乙酸酐加入时，伊维菌素会发生酸解，同样无法正常发生衍生化反应，所以在加入三氟乙酸酐溶液之前需要将体系干燥除水，再加入有机弱碱性保护剂氮甲基咪唑或DMF保护，衍生化才会有顺利完成的条件；且衍生化反应需要加热，可是，热稳定性试验结果告诉我，伊维菌素在65度以上开始发生热分解反应，因此，衍生化反应温度可以控制在50-55度，满足如上条件后，衍生化就成功啦！仔细研究一下您的“理想的衍生条件”哦？