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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于Elisa实验中吸光度值衰减的问题
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alden127

新虫 (小有名气)

[交流] 关于Elisa实验中吸光度值衰减的问题 已有3人参与

最近在elisa实验中发现一个问题：加完显色液(购买)显色一定时间后，再加终止液（2M H2SO4，自己配制）后，立即测试其吸光度值，等过几分钟再测试吸光度值，发现两次测得的吸光度值发生衰减。第二次均小于第一次。
    而且还有一个奇怪的现象：加终止液时，从第一条加到第12条后，测试发现，吸光度值从1-12条逐级衰减。前提是这12条酶标板都是同一种产品，并且包被相同蛋白。

    有没有其他虫友发现这问题，请来讨论和指点下。
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1楼 2011-05-25 10:20:05
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小新3858

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
终止后，吸光度值是会随着时间衰减，所以一般是加完终止液后立即测，这样比较准。至于吸光度值从1-12条逐级衰减的奇怪现象没碰到过。
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2楼2011-05-25 10:40:39
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alden127

新虫 (小有名气)
silicare: 排枪吧 2011-05-25 11:17:32
谢谢，我就是立即测试的。
逐条衰减我的理解是，从第一条加到第十二条，中间过了近1min。等加完第十二条时，第一条已经衰减1min了，以此递减。
不知道这样解释对不对。
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3楼2011-05-25 10:48:02
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yaojc

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
silicare(金币+5, EPI+1): 2011-05-25 12:10:49
1、可能你购买的显色液质量不是很好，一般情况下，终止反应后OD值的下降前期不是很明显。
2、分析12条显示逐级递减的原因
a:显色时间调整，如果你现在的显色时间是10MIN，那调整到30MIN，再加终止液,观察上述现象是否出现。
b:终止液中加入少量甘油看下怎么样。
祝试验顺利。
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专注、专心、专业
4楼2011-05-25 11:03:16
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alden127

新虫 (小有名气)
谢谢高人的建议，这条很重要："b:终止液中加入少量甘油看下怎么样。"
以前用买来的终止液，衰减不明显。后来自己配就明显了。
不过，甘油该加多少呢，这个我不是很确定。
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5楼2011-05-25 11:13:41
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yaojc

木虫 (正式写手)
1%好像是
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专注、专心、专业
6楼2011-05-25 16:50:42
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alden127

新虫 (小有名气)
谢谢！！！！
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7楼2011-05-26 08:09:55
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alden127

新虫 (小有名气)
可能显色液也有问题，有时候倒出来发现有沉淀。我用的碧云天的显色液，不知道其他虫友用的哪种，我把显色液换了试试。
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8楼2011-05-26 10:15:41
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梁顺涛

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我的也是，但是只要显示最大值和说明书上对应的OD值相差不大就行。还有，我用的是BD公司的试剂盒。显色时间是30分钟，终止后要求在30分钟内检测，我的一点经验时加入终止液后，最好在加入终止液后2到3分终内检测，这是OD值相对比较高。拟合值能达到四个9.
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9楼2013-11-17 13:51:21
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