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alden127

新虫 (小有名气)

[交流] 关于Elisa实验中吸光度值衰减的问题已有3人参与

最近在elisa实验中发现一个问题:加完显色液(购买)显色一定时间后,再加终止液(2M H2SO4,自己配制)后,立即测试其吸光度值,等过几分钟再测试吸光度值,发现两次测得的吸光度值发生衰减。第二次均小于第一次。
    而且还有一个奇怪的现象:加终止液时,从第一条加到第12条后,测试发现,吸光度值从1-12条逐级衰减。前提是这12条酶标板都是同一种产品,并且包被相同蛋白。

    有没有其他虫友发现这问题,请来讨论和指点下。
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小新3858

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
终止后,吸光度值是会随着时间衰减,所以一般是加完终止液后立即测,这样比较准。至于吸光度值从1-12条逐级衰减的奇怪现象没碰到过。
2楼2011-05-25 10:40:39
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alden127

新虫 (小有名气)

silicare: 排枪吧 2011-05-25 11:17:32
谢谢,我就是立即测试的。
逐条衰减我的理解是,从第一条加到第十二条,中间过了近1min。等加完第十二条时,第一条已经衰减1min了,以此递减。
不知道这样解释对不对。
3楼2011-05-25 10:48:02
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yaojc

木虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
silicare(金币+5, EPI+1): 2011-05-25 12:10:49
1、可能你购买的显色液质量不是很好,一般情况下,终止反应后OD值的下降前期不是很明显。
2、分析12条显示逐级递减的原因
a:显色时间调整,如果你现在的显色时间是10MIN,那调整到30MIN,再加终止液,观察上述现象是否出现。
b:终止液中加入少量甘油看下怎么样。
祝试验顺利。
专注、专心、专业
4楼2011-05-25 11:03:16
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alden127

新虫 (小有名气)

谢谢高人的建议,这条很重要:"b:终止液中加入少量甘油看下怎么样。"
以前用买来的终止液,衰减不明显。后来自己配就明显了。
不过,甘油该加多少呢,这个我不是很确定。
5楼2011-05-25 11:13:41
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yaojc

木虫 (正式写手)

1%好像是
专注、专心、专业
6楼2011-05-25 16:50:42
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alden127

新虫 (小有名气)

谢谢!!!!
7楼2011-05-26 08:09:55
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alden127

新虫 (小有名气)

可能显色液也有问题,有时候倒出来发现有沉淀。我用的碧云天的显色液,不知道其他虫友用的哪种,我把显色液换了试试。
8楼2011-05-26 10:15:41
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梁顺涛

金虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我的也是,但是只要显示最大值和说明书上对应的OD值相差不大就行。还有,我用的是BD公司的试剂盒。显色时间是30分钟,终止后要求在30分钟内检测,我的一点经验时加入终止液后,最好在加入终止液后2到3分终内检测,这是OD值相对比较高。拟合值能达到四个9.
9楼2013-11-17 13:51:21
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