应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药代动力学 » 标准血浆的处理
51/1返回列表
查看: 3186  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

桑枝

新虫 (初入文坛)

[求助] 标准血浆的处理 已有1人参与

最近在做药动学，有几个疑问向请教一下大家。
一、在做标准曲线时两种方法哪种对啊？
我取的是100μL空白血浆，加内标10μL，两倍体积甲醇沉淀蛋白，涡旋（涡旋时间有必要考察吗？）后，12000R/min离心10min，取上清液进样，进样量5μL。
1.直接加10μL不同浓度的对照品溶液在血浆里面配成一系列浓度的标准血浆。这个浓度时按照100μL作为体积来看，还是还应算成110μL或者血浆加成90μL。那么在我后面给药后取血浆的样品中没有加这10μL的对照品，那么是不是应该在血浆中加入10μL甲醇，10μL内标后再两倍体积甲醇沉淀蛋白，来和方法学考察中提取的方法保持一致？
2.将对照品氮气吹干后加入100μL空白血浆，10μL内标物，两倍体积甲醇沉淀蛋白，涡旋后，12000R/min离心10min，取上清液进样，进样量5μL。

二、从经验上来判断取上清液进样的回收率高还是上清液吹干复溶回收率高？做提取回收率的时候是直接与同浓度对照品溶液峰面积比来算还是空白血浆处理好以后再加同浓度对照品溶液复溶后峰面积比来计算呢？

三、标准曲线是要取六个来源不同的空白血浆来做平行还是都用一只兔子的空白血浆就行？那么计算标准曲线时是拿六个点的平均数来算吗？

四、以后的样品测定中每批的随行标准曲线是要每天都重做吗？可以保留之前做的反复进样来做标曲吗？

问题比较多，拜托大家了~
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

药学相关 2015资料

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2015-01-28 16:49:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

桑枝

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by rosegarden at 2015-01-28 19:03:20
一，标准曲线的做法，很二种比较规范。但操作复杂，可简化为加标液后，加空白血，再加内标，加沉淀剂甲醇的时候减去标液体积10ul,加190ul。
二，回收率肯定是直接蛋白沉淀的比较高。计算回收率的对照品是空白血浆处 ...

你好，那请问沉淀蛋白时的两倍量体积甲醇不用考虑内标液的体积吗？
假如是处理的样品，100μL血浆加10μL内标，我以前都是加的220μL甲醇来沉淀蛋白。还是说我一直做错了，只要血浆的两倍就行？
赞一下 回复此楼
3楼2015-01-28 20:15:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

rosegarden

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
桑枝: 金币+12, ★★★很有帮助 2015-01-31 10:35:03
一，标准曲线的做法，很二种比较规范。但操作复杂，可简化为加标液后，加空白血，再加内标，加沉淀剂甲醇的时候减去标液体积10ul,加190ul。
二，回收率肯定是直接蛋白沉淀的比较高。计算回收率的对照品是空白血浆处理后，再加入标准溶液。
三，如果用液质做，要考察不同来源基质的基质效应。做标曲的时候，可以将不同来源的基质混合即可。做一条标曲就可以。
四，正规做法是每个分析批标曲新鲜配置。
赞一下 回复此楼
坚持
2楼2015-01-28 19:03:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rosegarden

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 桑枝 at 2015-01-28 20:15:41
你好，那请问沉淀蛋白时的两倍量体积甲醇不用考虑内标液的体积吗？
假如是处理的样品，100μL血浆加10μL内标，我以前都是加的220μL甲醇来沉淀蛋白。还是说我一直做错了，只要血浆的两倍就行？...

这个甲醇沉淀的体积是你自己决定的，你想用220ul也可以，但是，你表述的1:2沉淀，肯定是相对于血浆来说的，所以是200ul。只要是你做标准曲线的时候平行就行了，对定量没有影响。
赞一下 回复此楼
坚持
4楼2015-01-28 20:27:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rosegarden

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

一般我习惯的做法是甲醇1:3沉淀，可能可以获得更好的提取回收率。
兼顾灵敏度的情况下，你可以参考一下
赞一下 回复此楼
坚持
5楼2015-01-28 20:30:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +12 医学老男孩 2026-08-13 31/1550 2026-08-14 07:47 by 医学老男孩
[基金申请] FileCode能看出啥？ +10 要乐观耀哥 2026-08-10 29/1450 2026-08-14 07:42 by 要乐观耀哥
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +3 启萌科技 2026-08-12 11/550 2026-08-13 22:57 by 启萌科技
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的，真有人买论文么？感觉没必要啊 +9 Tide man 2026-08-10 10/500 2026-08-13 20:33 by 温淼淼淼
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] filecode +14 documentary 2026-08-10 16/800 2026-08-13 16:39 by 润生71
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了，巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[论文投稿] 职称评审，求友友推荐见刊最快的期刊 +4 工厂打螺丝 2026-08-08 4/200 2026-08-12 09:18 by hansi2025
[基金申请] 奇怪，两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +7 布布和一二 2026-08-10 10/500 2026-08-12 09:12 by 布布和一二
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果？ +3 yuleib84 2026-08-11 3/150 2026-08-11 21:53 by jnhyjjm
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[硕博家园] 读博的好处 +3 lnee 2026-08-11 3/150 2026-08-11 18:10 by 希望我好好的
[基金申请] 关于代码变化问题，想知道的进来 +17 且听虎啸 2026-08-07 24/1200 2026-08-10 18:35 by zhangduo2008
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +5 布布和一二 2026-08-07 5/250 2026-08-09 16:15 by 袁向阳007
[基金申请] fileCode有新解读？ +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制，评价高的钱多评价低的钱少，但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变，有变的大神么？ +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭