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踮起脚尖2012

银虫 (小有名气)

[求助] 新人做药代,请教血浆药物浓度测定问题

测大鼠血浆中药物浓度,请问怎么用HPLC定量啊?想用外标法。
现有两种想法。
1、做好标准曲线后,每次进一针处理好的血样,然后从工作曲线上查浓度。这样因为不是一次完成,液相每天每次会有波动,会不会造成测定数据不准确?
2、做好标准曲线后,每次进一针已知浓度的标准液,进一针处理好的血样,用外标一点法定量,这样可以吗?
请问哪种方法比较好,还是有更好的第三种方法?
请指教,请指教,请指教,请指教,请指教,请指教!
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airhblue11

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
xiaoxiao270: 金币+1, 谢谢交流 2013-11-23 18:02:41
踮起脚尖2012: 金币+1, ★★★★★最佳答案 2013-11-24 13:30:42
药动的话标曲也须以血浆为基质进行测定,一般的方法为:**ul血浆+**混标溶液,混合后按样品相同的处理方法处理(如醇沉-浓缩-复溶)后进行检测,形成标曲,然后你再走样品就可以根据标曲算出浓度了。
一般来说,药动标曲每天需要做一条(特别是质谱测定的话),波动当然会存在,所以要进行方法学的考察,如精密度、稳定性等。质谱的话RSD在15%以内就算合格,LLOD可以在20%以内
4楼2013-11-23 17:30:58
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rosegarden

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
xiaoxiao270: 金币+1, 谢谢交流 2013-11-24 10:59:45
踮起脚尖2012: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-11-24 13:29:53
建议你去看下临床药代动力学研究的指导原则,方法学部分
坚持
6楼2013-11-24 10:38:37
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rosegarden

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
xiaoxiao270: 金币+1, 谢谢交流 2013-11-24 10:59:53
踮起脚尖2012: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-11-24 13:29:37
引用回帖:
5楼: Originally posted by 踮起脚尖2012 at 2013-11-24 09:36:35
哦,这样啊!太感谢了!
意思就是用内标,外标定量都可以呗?就是每天做一个标准曲线,可是液相做一个标曲很费时间的啊?...

生物样本测试有比较复杂的前处理过程,推荐内标法
坚持
7楼2013-11-24 10:41:16
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kkbyb

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

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xiaoxiao270: 金币+1, 谢谢交流 2013-11-23 18:02:33
踮起脚尖2012: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-11-24 13:30:15
批内定量,随行标曲,这是规定
2楼2013-11-23 14:35:07
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普通回帖

踮起脚尖2012

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by kkbyb at 2013-11-23 14:35:07
批内定量,随行标曲,这是规定

额,行内术语吗?不懂,能解释一下吗?就是用内标法吗?什么是随行标曲啊?亲,解释一下呗
3楼2013-11-23 15:02:15
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踮起脚尖2012

银虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by airhblue11 at 2013-11-23 17:30:58
药动的话标曲也须以血浆为基质进行测定,一般的方法为:**ul血浆+**混标溶液,混合后按样品相同的处理方法处理(如醇沉-浓缩-复溶)后进行检测,形成标曲,然后你再走样品就可以根据标曲算出浓度了。
一般来说,药动 ...

哦,这样啊!太感谢了!
意思就是用内标,外标定量都可以呗?就是每天做一个标准曲线,可是液相做一个标曲很费时间的啊?
5楼2013-11-24 09:36:35
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踮起脚尖2012

银虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by rosegarden at 2013-11-24 10:38:37
建议你去看下临床药代动力学研究的指导原则,方法学部分

临床药代动力学研究   是一本书吗?亲
8楼2013-11-24 13:07:28
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airhblue11

银虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 踮起脚尖2012 at 2013-11-24 09:36:35
哦,这样啊!太感谢了!
意思就是用内标,外标定量都可以呗?就是每天做一个标准曲线,可是液相做一个标曲很费时间的啊?...

一般药动标准曲线都是加内标的,如果标曲y=ax+b,一般标曲的话它的Y代表的意思是被测物峰面积,采用内标后y代表的意思就是被测物/内标峰面积所得的比值。
标曲具体操作是这样的:打个比方,200ul血浆+50ul不同浓度标准品溶液+20ul内标溶液,然后进行处理。
液相的话波动小,如果能在要求范围内,一条标曲也是可以的。具体可以看你样品量的多少。
9楼2013-11-24 17:32:06
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踮起脚尖2012

银虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by airhblue11 at 2013-11-24 17:32:06
一般药动标准曲线都是加内标的,如果标曲y=ax+b,一般标曲的话它的Y代表的意思是被测物峰面积,采用内标后y代表的意思就是被测物/内标峰面积所得的比值。
标曲具体操作是这样的:打个比方,200ul血浆+50ul不同浓度 ...

多谢啦!
10楼2013-11-24 18:09:39
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