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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药代动力学 » 提高血浆前处理回收率
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liu58yeying

金虫 (小有名气)

[求助] 提高血浆前处理回收率

请问一下大家，我在做一个化合物的空白血浆回收率测定实验。现在回收率竟然低到10%左右，但不知道问题出来哪里。化合物有两个酚羟基，应该略显酸性，并且有一个较长的脂肪链，估计极性偏小。我的处理方法如下：1. 加入蛋白沉淀剂。 2. 混匀超声。3. 13000 r/min 离心。4 取上清。5. 旋干并复溶 进样HPLC。

我感觉这个化合物的血浆蛋白结合率会很高吧，是在离心的这一步，化合物都被裹在下面的不溶物里面了。应该怎样提高回收率呢, 是不是要调整一下PH呢（比如加入低浓度的盐酸），或者增加超声时间？

刚刚做代谢，请多指教啊，谢谢。
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1楼2012-09-21 16:57:09
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

niuniuabenye

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by liu58yeying at 2012-09-21 19:16:22
你好啊，谢谢你的指导。我的师姐做过液液萃取，据她说，因为血浆有200ul左右，加入600 ul 乙酸乙酯，混匀后离心，导致两相中间有一层白白的东西。她的回收率还没有蛋白沉淀高。
那我请教下，看我能不能这样改进下 ...

还是建议试一下液液萃取，将血浆酸化，加10%的甲酸10~20ul。因为你的化合物是酸性的，调整水相PH低于化合物2~3个PH，理论上是可以提高回收率的。
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liu58yeying
4楼2012-09-27 13:01:04
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肉园

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
liu58yeying: 金币+5 2012-09-21 19:18:03
小极性的化合物，要不试试液液萃取？通常来说沉淀法适合极性较大的化合物~~
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2楼2012-09-21 17:48:49
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liu58yeying

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 肉园 at 2012-09-21 17:48:49
小极性的化合物，要不试试液液萃取？通常来说沉淀法适合极性较大的化合物~~

你好啊，谢谢你的指导。我的师姐做过液液萃取，据她说，因为血浆有200ul左右，加入600 ul 乙酸乙酯，混匀后离心，导致两相中间有一层白白的东西。她的回收率还没有蛋白沉淀高。
那我请教下，看我能不能这样改进下：
1. 在原血浆中加入酸化的NaCl 水溶液，扩容到600 ul， 然后再加入乙酸乙酯进行萃取。
2. 离心速率应该是多少呢，是不是改变一下离心速率，中间的一层就不会出现啦？

然后再问一下，之前我用蛋白沉淀法，加入沉淀剂后超声，回收率有明显提高，但我看一般的操作都没提到超声啊。

谢谢啊，希望得到你的指导。
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3楼2012-09-21 19:16:22
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liu58yeying

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by niuniuabenye at 2012-09-27 13:01:04
还是建议试一下液液萃取，将血浆酸化，加10%的甲酸10~20ul。因为你的化合物是酸性的，调整水相PH低于化合物2~3个PH，理论上是可以提高回收率的。...

哦，谢谢啊，我一定试试。最近我又发现这个化合物在HPLC上分析的时候前面靠近溶剂峰的位置，峰面积和形态会明显变化，怀疑化合物是不是变质了，毕竟化合物上有两个酚羟基。我干燥复溶是用离心浓缩机干燥的，温度40多度，应该是变质了吧~正确的方法是不是应该用氮吹啊。我们实验室不是做这方面的，所以很多操作不规范，谢谢指教哈
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5楼2012-09-28 10:21:48
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mirror822

禁虫 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
6楼2012-10-15 08:56:45
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破土草儿

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

先试一下你化合物标准品的峰。还有注意下是否旁边有干扰峰，产生离子抑制。
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7楼2012-10-20 23:15:19
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liu58yeying

金虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by niuniuabenye at 2012-09-27 13:01:04
还是建议试一下液液萃取，将血浆酸化，加10%的甲酸10~20ul。因为你的化合物是酸性的，调整水相PH低于化合物2~3个PH，理论上是可以提高回收率的。...

试了一下，还是很有改善的，谢谢~
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8楼2012-10-21 08:16:45
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蔡倩

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

楼主，我想问下，看你帖子应该也是小剂量萃取，你们用的什么萃取装置啊，过程损失是怎么算的啊，麻烦了
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9楼2012-12-03 16:07:12
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xxdylj_428

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

我个人认为，针对你测定的化合物性质，我建议还是采用酸沉淀蛋白结合液液萃取的方式较合理，
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我将在中药复方成分分析、代谢及应答这个领域一直研究下去
10楼2012-12-04 08:42:43
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