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王雪松_

铁虫 (初入文坛)

[求助] PCR操作中的问题已有3人参与

各位好,我以前没有做过PCR,现在做了很长时间,操作已经非常熟练,但却一直做不出来,老师用同样的引物同样的材料能做出来,我实在找不到问题出在什么地方,十分的着急!!希望经验丰富的朋友帮忙找找问题出在哪儿!十分感谢!  有时候做出来有几条带,我确定模板引物都加到位了,体系用的mix那种操作起来也简单了一点。跑电泳应该没有什么问题吧,每次MARK都有的。
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huangleigsn

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
王雪松_: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢啊,但是老师却能做出来,应该是我自己操作的问题,不是试剂的问题 2015-01-04 09:17:39
用控制变量做对照,我有一次老是做不出来,最后用别人扩增效果好的~一全套引物,模板。包括酶,dntp, buffer.每次变一个量,最后查出来是高保真聚合酶的问题,我当时就醉了!

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2015-01-04 08:42:09
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖

★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2015-01-07 16:39:44
应该考虑一下酶的问题,没有条带,是否是引物或模板降解了哦 如果不是,那就是酶的问题了
推荐Relia热启动Taq酶 谢谢 http://www.detaibio.com/relia-hotstart-polymerase.html
todayisdifficult,tomorrowismoredifficult,butthedayaftertomorrowisbeautiful
3楼2015-01-07 11:02:32
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titus0805

铁虫 (小有名气)

要是别人能做出来你做不出来,那就只有两个字,手潮
这个是无解的
4楼2015-01-07 11:14:15
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王雪松_

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 18761615793 at 2015-01-07 11:02:32
应该考虑一下酶的问题,没有条带,是否是引物或模板降解了哦 如果不是,那就是酶的问题了
推荐Relia热启动Taq酶 谢谢 http://www.detaibio.com/relia-hotstart-polymerase.html

我也觉得是,,捉急
5楼2015-01-07 15:53:00
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

引用回帖:
5楼: Originally posted by 王雪松_ at 2015-01-07 15:53:00
我也觉得是,,捉急...

加油哦,功夫不负有心人呐 肯定会做出来的  呵呵
todayisdifficult,tomorrowismoredifficult,butthedayaftertomorrowisbeautiful
6楼2015-01-08 09:05:35
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
王雪松_: 金币+2, 谢谢 2015-01-20 09:35:21
王雪松_: 金币+3, 谢谢 2015-01-20 09:35:39
引用回帖:
5楼: Originally posted by 王雪松_ at 2015-01-07 15:53:00
我也觉得是,,捉急...

你好好琢磨琢磨,如果模板引物真的确定没有降解的话,那就换一种酶(最好是热启动的酶),结果应该会好的,祝你成功哦!
todayisdifficult,tomorrowismoredifficult,butthedayaftertomorrowisbeautiful
7楼2015-01-08 09:10:23
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肚糠稀同学

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

这种问题经常发生 是正常的  首先要接受这个事实  另外 如果模版没有问题 你用的是mix 那么问题一定在酶上 下次换一个新的  没开封的酶试一试呢
8楼2015-01-08 10:17:00
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