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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR操作中的问题
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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王雪松_

铁虫 (初入文坛)

[求助] PCR操作中的问题 已有3人参与

各位好，我以前没有做过PCR，现在做了很长时间，操作已经非常熟练，但却一直做不出来，老师用同样的引物同样的材料能做出来，我实在找不到问题出在什么地方，十分的着急！！希望经验丰富的朋友帮忙找找问题出在哪儿！十分感谢！  有时候做出来有几条带，我确定模板引物都加到位了，体系用的mix那种操作起来也简单了一点。跑电泳应该没有什么问题吧，每次MARK都有的。
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1楼 2015-01-04 08:28:59
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huangleigsn

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
王雪松_: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢啊，但是老师却能做出来，应该是我自己操作的问题，不是试剂的问题 2015-01-04 09:17:39
用控制变量做对照，我有一次老是做不出来，最后用别人扩增效果好的～一全套引物，模板。包括酶，dntp, buffer.每次变一个量，最后查出来是高保真聚合酶的问题，我当时就醉了！

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2楼2015-01-04 08:42:09
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖

★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2015-01-07 16:39:44
应该考虑一下酶的问题，没有条带，是否是引物或模板降解了哦 如果不是，那就是酶的问题了
推荐Relia热启动Taq酶 谢谢 http://www.detaibio.com/relia-hotstart-polymerase.html
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todayisdifficult，tomorrowismoredifficult，butthedayaftertomorrowisbeautiful
3楼2015-01-07 11:02:32
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titus0805

铁虫 (小有名气)
要是别人能做出来你做不出来，那就只有两个字，手潮
这个是无解的
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4楼2015-01-07 11:14:15
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王雪松_

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 18761615793 at 2015-01-07 11:02:32
应该考虑一下酶的问题，没有条带，是否是引物或模板降解了哦 如果不是，那就是酶的问题了
推荐Relia热启动Taq酶 谢谢 http://www.detaibio.com/relia-hotstart-polymerase.html

我也觉得是，，捉急
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5楼2015-01-07 15:53:00
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫
引用回帖:
5楼: Originally posted by 王雪松_ at 2015-01-07 15:53:00
我也觉得是，，捉急...

加油哦，功夫不负有心人呐 肯定会做出来的  呵呵
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6楼2015-01-08 09:05:35
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
王雪松_: 金币+2, 谢谢 2015-01-20 09:35:21
王雪松_: 金币+3, 谢谢 2015-01-20 09:35:39
引用回帖:
5楼: Originally posted by 王雪松_ at 2015-01-07 15:53:00
我也觉得是，，捉急...

你好好琢磨琢磨，如果模板引物真的确定没有降解的话，那就换一种酶（最好是热启动的酶），结果应该会好的，祝你成功哦！
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7楼2015-01-08 09:10:23
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肚糠稀同学

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

这种问题经常发生 是正常的  首先要接受这个事实  另外 如果模版没有问题 你用的是mix 那么问题一定在酶上 下次换一个新的  没开封的酶试一试呢
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8楼2015-01-08 10:17:00
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