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BL21表达蛋白量很低
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| 我用BL21 表达两个甘露醇合成酶,都是用pET30a构建表达载体,第一个表达大小是42kD左右,第二个是71kD左右。第一个有表达趋势,大小正确,包涵体和可溶都有,量还可以;第二个依稀有表达,大小也差不多,包涵体中较多,可溶也有,但量少到可以忽略。第一个蛋白纯化效果还可以,第二个因为量少,相对的杂蛋白的量很大,多次纯化效果都不好,在40和70kD都会出现明显的带。且用抗His的一抗做WB,神奇的是两 种蛋白在 40和70kD两个位置均出现了亮带,不同的是,第一个蛋白在目的位置40kD的带特别亮,而70kD处较弱,而第二个蛋白在两个位置的带亮度差异不大。这个求大神指点!!!!!!!!!!!!!!!! |
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