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陈彦利铁虫 (小有名气)
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[求助]
西红柿果肉RNA提取，降解严重 已有10人参与
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第一次提RNA，最近提西红柿果肉RNA，降解很严重（见图）。西红柿果肉在液氮中不好研磨，所以我直接在裂解液里研磨的，大概2~3g西红柿加3 mTRNzol试剂研磨（样品量是不是大了？），用的是天根的TRNzol 总 RNA 提取试剂盒，电泳用1%琼脂糖电泳，90V，电泳20min。上样时，好几次都是样品都飘起来，沉不下去，是不是乙醇挥发不彻底？请老师们同学们帮忙分析一下。提了很多次都这样，快崩溃了...求过来人指导！ 20141215_095059.jpg |
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【答案】应助回帖
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1.你的样品加入太多了，一般试剂盒只需要50mg-100mg样品即可，太多的话内源性的RNase太多，Trizol里的抑制剂抑制效果不完全。 2.你的电泳时间太久了，难免会分解严重。再次重复下试试，将电泳缓冲液TAE重新换制，电压调高(150V)，时间缩短（10-15min），只要能区分去三条带即可。 3.确保提取过程中操作严格，保持空气不要流动，离心机全程4℃。 4.你说的上样时会飘起来？是不是没有用Loading Buffer染色？不会是酒精没挥发完全，可以测量纯度（OD260/230）来观察，有酒精残留时候会有乱峰，参考乙醇的峰型。 希望对你有用，祝你实验顺利。 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
陈彦利18楼2014-12-16 16:28:36
35楼2014-12-18 17:21:03
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， [ 发自小木虫客户端 ] |
2楼2014-12-15 15:51:43
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3楼2014-12-15 15:55:44
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4楼2014-12-15 15:58:09
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5楼2014-12-15 16:16:50
Neo2000
木虫 (著名写手)
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6楼2014-12-15 16:48:56
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7楼2014-12-15 17:56:03
myyounger
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8楼2014-12-15 18:08:19
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9楼2014-12-15 19:10:42
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10楼2014-12-15 19:57:08
