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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 西红柿果肉RNA提取，降解严重
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wanglulu0813
21楼2014-12-17 10:37:58
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陈彦利

铁虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
18楼: Originally posted by liyuecoool at 2014-12-16 16:28:36
1.你的样品加入太多了，一般试剂盒只需要50mg-100mg样品即可，太多的话内源性的RNase太多，Trizol里的抑制剂抑制效果不完全。
2.你的电泳时间太久了，难免会分解严重。再次重复下试试，将电泳缓冲液TAE重新换制，电 ...

谢谢你！对我这个小白很有用！我能加你好友吗？
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22楼2014-12-17 10:48:40
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陈彦利

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
18楼: Originally posted by liyuecoool at 2014-12-16 16:28:36
1.你的样品加入太多了，一般试剂盒只需要50mg-100mg样品即可，太多的话内源性的RNase太多，Trizol里的抑制剂抑制效果不完全。
2.你的电泳时间太久了，难免会分解严重。再次重复下试试，将电泳缓冲液TAE重新换制，电 ...

我按着大家的建议，重新做了一遍：
1.因为西红柿含水量太高（~90%+），所以我昨天做了一次，800 mg样品，加2.5 ml TRNzol试剂研磨。
2.离心全程4℃;
3.电泳加大了LOADING BUFFER的量（2.5 ul  buffe+5 ul  样品，上样5 ul）r，解决了样品飘起来的问题;
4.电泳缓冲液：实验室之前配好的50×TAE，稀释到1× TAE作为电泳缓冲液。
5.电泳条件：改为120 V，10 min；
结果：1.电泳条带还是一样，降解严重；  
2.Nanodrop 测得RNA浓度为~700 ng/ul，  260/280:1.60,  260/230:0.40;（之前得到的浓度一般是200 ng/ul左右）

我在考虑要不要换试剂盒，因为用别的实验室的盒子提的效果还不错！
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23楼2014-12-17 11:06:23
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小爷不狂91

禁虫 (著名写手)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
24楼2014-12-17 11:46:22
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小爷不狂91

禁虫 (著名写手)
本帖内容被屏蔽
25楼2014-12-17 11:49:05
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甲方不怕乙方

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
loading buffer 只是一个指示作用 没必要那么多1ul 足够

[ 发自小木虫客户端 ]
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我要让你的生活因为有我而更精彩
26楼2014-12-17 11:54:56
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陈彦利

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
25楼: Originally posted by 小爷不狂91 at 2014-12-17 11:49:05
感觉700ng也太大了，，你确定是样品降解了？...

最下边的那条带那么亮，上边的两条那么暗，不是说明RNA降解了吗？我提出来后用50ul 双蒸水溶解的。样品量还要降低吗？含水量那么高呢。
   我也不知道该怎么办了...
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27楼2014-12-17 12:15:58
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其实会很在意

金虫 (正式写手)
祝楼主心想事成，未来更好
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却看妻子愁何在，漫卷诗书喜欲狂
28楼2014-12-17 12:27:14
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小爷不狂91

禁虫 (著名写手)
本帖内容被屏蔽
29楼2014-12-17 13:02:24
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bjb98
祝福
30楼2014-12-17 16:08:47
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