【答案】应助回帖

陈彦利

铁虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 8.9
散金: 117
帖子: 140
在线: 71.4小时
虫号: 2174654
注册: 2012-12-08
性别: MM
专业: 临床分子生物学检验

送红花一朵

引用回帖:

18楼: Originally posted by liyuecoool at 2014-12-16 16:28:36
1.你的样品加入太多了，一般试剂盒只需要50mg-100mg样品即可，太多的话内源性的RNase太多，Trizol里的抑制剂抑制效果不完全。
2.你的电泳时间太久了，难免会分解严重。再次重复下试试，将电泳缓冲液TAE重新换制，电 ...

谢谢你！对我这个小白很有用！我能加你好友吗？

22楼2014-12-17 10:48:40

陈彦利

铁虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 8.9
散金: 117
帖子: 140
在线: 71.4小时
虫号: 2174654
注册: 2012-12-08
性别: MM
专业: 临床分子生物学检验

引用回帖:

我按着大家的建议，重新做了一遍：
1.因为西红柿含水量太高（~90%+），所以我昨天做了一次，800 mg样品，加2.5 ml TRNzol试剂研磨。
2.离心全程4℃;
3.电泳加大了LOADING BUFFER的量（2.5 ul  buffe+5 ul  样品，上样5 ul）r，解决了样品飘起来的问题;
4.电泳缓冲液：实验室之前配好的50×TAE，稀释到1× TAE作为电泳缓冲液。
5.电泳条件：改为120 V，10 min；
结果：1.电泳条带还是一样，降解严重；
2.Nanodrop 测得RNA浓度为~700 ng/ul，  260/280:1.60,  260/230:0.40;（之前得到的浓度一般是200 ng/ul左右）

我在考虑要不要换试剂盒，因为用别的实验室的盒子提的效果还不错！

23楼2014-12-17 11:06:23

小爷不狂91

禁虫 (著名写手)

感谢参与，应助指数 +1

本帖内容被屏蔽

24楼2014-12-17 11:46:22

小爷不狂91

禁虫 (著名写手)

本帖内容被屏蔽

25楼2014-12-17 11:49:05

甲方不怕乙方

木虫 (正式写手)

应助: 21 (小学生)
金币: 2733.5
散金: 2338
红花: 10
帖子: 460
在线: 125.6小时
虫号: 2132025
注册: 2012-11-17
性别: GG
专业: 水产生物营养与饲料学

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

loading buffer 只是一个指示作用没必要那么多1ul 足够

[ 发自小木虫客户端 ]

我要让你的生活因为有我而更精彩

26楼2014-12-17 11:54:56

陈彦利

铁虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 8.9
散金: 117
帖子: 140
在线: 71.4小时
虫号: 2174654
注册: 2012-12-08
性别: MM
专业: 临床分子生物学检验

引用回帖:

25楼: Originally posted by 小爷不狂91 at 2014-12-17 11:49:05
感觉700ng也太大了，，你确定是样品降解了？...

最下边的那条带那么亮，上边的两条那么暗，不是说明RNA降解了吗？我提出来后用50ul 双蒸水溶解的。样品量还要降低吗？含水量那么高呢。
我也不知道该怎么办了...

27楼2014-12-17 12:15:58

其实会很在意

金虫 (正式写手)

应助: 2 (幼儿园)
金币: 172.1
红花: 4
帖子: 440
在线: 40小时
虫号: 3589995
注册: 2014-12-11
性别: MM
专业: 凝聚态物性 II ：电子结构

祝楼主心想事成，未来更好

却看妻子愁何在，漫卷诗书喜欲狂

28楼2014-12-17 12:27:14

小爷不狂91

禁虫 (著名写手)

本帖内容被屏蔽

29楼2014-12-17 13:02:24

bjb98

祝福

30楼2014-12-17 16:08:47