24小时热门版块排行榜

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

陈彦利

铁虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 8.9
散金: 117
帖子: 140
在线: 71.4小时
虫号: 2174654
注册: 2012-12-08
性别: MM
专业: 临床分子生物学检验

[求助] 西红柿果肉RNA提取，降解严重已有10人参与

第一次提RNA，最近提西红柿果肉RNA，降解很严重（见图）。西红柿果肉在液氮中不好研磨，所以我直接在裂解液里研磨的，大概2~3g西红柿加3 mTRNzol试剂研磨（样品量是不是大了？），用的是天根的TRNzol 总 RNA 提取试剂盒，电泳用1%琼脂糖电泳，90V，电泳20min。上样时，好几次都是样品都飘起来，沉不下去，是不是乙醇挥发不彻底？请老师们同学们帮忙分析一下。提了很多次都这样，快崩溃了...求过来人指导！

20141215_095059.jpg

回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

1楼 2014-12-15 15:51:33

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

陈彦利

铁虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 8.9
散金: 117
帖子: 140
在线: 71.4小时
虫号: 2174654
注册: 2012-12-08
性别: MM
专业: 临床分子生物学检验

引用回帖:

18楼: Originally posted by liyuecoool at 2014-12-16 16:28:36
1.你的样品加入太多了，一般试剂盒只需要50mg-100mg样品即可，太多的话内源性的RNase太多，Trizol里的抑制剂抑制效果不完全。
2.你的电泳时间太久了，难免会分解严重。再次重复下试试，将电泳缓冲液TAE重新换制，电 ...

我按着大家的建议，重新做了一遍：
1.因为西红柿含水量太高（~90%+），所以我昨天做了一次，800 mg样品，加2.5 ml TRNzol试剂研磨。
2.离心全程4℃;
3.电泳加大了LOADING BUFFER的量（2.5 ul  buffe+5 ul  样品，上样5 ul）r，解决了样品飘起来的问题;
4.电泳缓冲液：实验室之前配好的50×TAE，稀释到1× TAE作为电泳缓冲液。
5.电泳条件：改为120 V，10 min；
结果：1.电泳条带还是一样，降解严重；
2.Nanodrop 测得RNA浓度为~700 ng/ul，  260/280:1.60,  260/230:0.40;（之前得到的浓度一般是200 ng/ul左右）

我在考虑要不要换试剂盒，因为用别的实验室的盒子提的效果还不错！