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leozym

银虫 (小有名气)

[求助] 细胞复苏状况不好 已有2人参与

细胞有今年一月份和四月份冻存的,一直在-80度的冰箱,近期购置了液氮罐,所以拿出来复苏,计划传几代放冻存留着明年做实验用,但是状况不好,复苏之后没有几个活着的,或是有活着的上面总是有亮亮的珠珠飘着,不算多,但是一直有。想了解下是怎么回事,还有怎样可以使细胞复苏的存活率高些,难道是时间太长,没救了吗。ps.冻存的时候不是我冻的,我是非专业新手,还不太懂,目前主要是复苏各种转染的293细胞。
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董博士

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
时间太长确实不容易复苏,复苏的时候,快速融化后,直接加大量的培养基(10毫升左右)进行培养,稀释DMSO对细胞的损害,如果只有几个细胞复苏活了,一定不要放弃,勤换液,一天早中午都要观察细胞,我之前复苏过一个细胞,只有两个活细胞,最后花了将近一个月把它救活了,我们经常说要像养孩子一样养着你的细胞,祝实验顺利!
医学&统计学
2楼2014-12-14 12:54:38
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leozym

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 董博士 at 2014-12-14 12:54:38
时间太长确实不容易复苏,复苏的时候,快速融化后,直接加大量的培养基(10毫升左右)进行培养,稀释DMSO对细胞的损害,如果只有几个细胞复苏活了,一定不要放弃,勤换液,一天早中午都要观察细胞,我之前复苏过一个 ...

嗯嗯,谢谢

[ 发自小木虫客户端 ]
3楼2014-12-14 14:44:19
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leozym

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 董博士 at 2014-12-14 12:54:38
时间太长确实不容易复苏,复苏的时候,快速融化后,直接加大量的培养基(10毫升左右)进行培养,稀释DMSO对细胞的损害,如果只有几个细胞复苏活了,一定不要放弃,勤换液,一天早中午都要观察细胞,我之前复苏过一个 ...

对了,你的意思是融化之后不要离心直接加培养基吗

[ 发自小木虫客户端 ]
4楼2014-12-14 14:45:04
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jora0418

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by leozym at 2014-12-14 14:45:04
对了,你的意思是融化之后不要离心直接加培养基吗
...

对 可以直接加培养基,要预热培养基然后稀释DMSO浓度。复苏24h内可以换次液~
我现在复苏冻在负80的293T细胞,细胞长得很长,感觉很不健康,不知道救得回来不。,。。。
5楼2015-12-03 18:45:23
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