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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 细胞复苏状况不好
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leozym

银虫 (小有名气)

[求助] 细胞复苏状况不好 已有2人参与

细胞有今年一月份和四月份冻存的，一直在-80度的冰箱，近期购置了液氮罐，所以拿出来复苏，计划传几代放冻存留着明年做实验用，但是状况不好，复苏之后没有几个活着的，或是有活着的上面总是有亮亮的珠珠飘着，不算多，但是一直有。想了解下是怎么回事，还有怎样可以使细胞复苏的存活率高些，难道是时间太长，没救了吗。ps.冻存的时候不是我冻的，我是非专业新手，还不太懂，目前主要是复苏各种转染的293细胞。
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1楼 2014-12-11 17:05:28
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leozym

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 董博士 at 2014-12-14 12:54:38
时间太长确实不容易复苏，复苏的时候，快速融化后，直接加大量的培养基（10毫升左右）进行培养，稀释DMSO对细胞的损害，如果只有几个细胞复苏活了，一定不要放弃，勤换液，一天早中午都要观察细胞，我之前复苏过一个 ...

对了，你的意思是融化之后不要离心直接加培养基吗

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4楼2014-12-14 14:45:04
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董博士

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
时间太长确实不容易复苏，复苏的时候，快速融化后，直接加大量的培养基（10毫升左右）进行培养，稀释DMSO对细胞的损害，如果只有几个细胞复苏活了，一定不要放弃，勤换液，一天早中午都要观察细胞，我之前复苏过一个细胞，只有两个活细胞，最后花了将近一个月把它救活了，我们经常说要像养孩子一样养着你的细胞，祝实验顺利！
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医学&统计学
2楼2014-12-14 12:54:38
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leozym

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 董博士 at 2014-12-14 12:54:38
时间太长确实不容易复苏，复苏的时候，快速融化后，直接加大量的培养基（10毫升左右）进行培养，稀释DMSO对细胞的损害，如果只有几个细胞复苏活了，一定不要放弃，勤换液，一天早中午都要观察细胞，我之前复苏过一个 ...

嗯嗯，谢谢

[ 发自小木虫客户端 ]
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3楼2014-12-14 14:44:19
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jora0418

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by leozym at 2014-12-14 14:45:04
对了，你的意思是融化之后不要离心直接加培养基吗
...

对 可以直接加培养基，要预热培养基然后稀释DMSO浓度。复苏24h内可以换次液~
我现在复苏冻在负80的293T细胞，细胞长得很长，感觉很不健康，不知道救得回来不。，。。。
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5楼2015-12-03 18:45:23
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