应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » NdeI内切酶的保护碱基个数？
161/2返回列表12下一页
查看: 5887  |  回复: 15
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

vito22

新虫 (小有名气)

[求助] NdeI内切酶的保护碱基个数？ 已有4人参与

近来用Thermo的NdeI，涉及加保护碱基的问题，有的人说需要加六个保护碱基，有的说七个，而根据NEB官网的提示，加三个就可以了（https://www.neb.com/tools-and-re ... nd-of-dna-fragments），请问有经验的虫友们，NdeI加几个保护碱基合适？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-12-09 15:14:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lpzl

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
vito22: 金币+10 2014-12-10 16:31:45
加3个保护碱基就可以了。。。我就是这么做的。
赞一下 回复此楼
Start_everyday_with_a_new_hope,_leave_bad_memories...
2楼2014-12-09 18:32:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
需要加吗？我从来不加，因为根本就不需要加保护碱基。

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

vito22
3楼2014-12-09 18:37:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

嘿小杨同志

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-12-10 20:07:54
http://wenku.baidu.com/link?url= ... NpZK_Qi8bGzg8Nm37Y_这里就有，一般来说我加了GGAATTC，但是不建议楼主选用这个酶切位点，太难切了。
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

vito22
4楼2014-12-09 19:33:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

意萧02

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-12-10 20:08:02
加两三个够了，一般没啥影响，很多人加都没加，照样可以，所以不要太纠结这个问题，不放心就加两三个意思意思，加上去的最好跟序列能够匹配，这样结合率高点
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

vito22
5楼2014-12-10 15:42:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

vito22

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lpzl at 2014-12-09 18:32:23
加3个保护碱基就可以了。。。我就是这么做的。

请问NdeI加3个保护碱基的酶切酶连效率如何？
赞一下 回复此楼
6楼2014-12-10 16:34:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

vito22

新虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-12-09 18:37:44
需要加吗？我从来不加，因为根本就不需要加保护碱基。

不需要加保护碱基？！请问不加保护碱基是针对哪个限制酶说的，还是所有的限制酶都不用加，不加的效率如何，NdeI有没有试过呢
赞一下 回复此楼
7楼2014-12-10 16:38:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

vito22

新虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by 嘿小杨同志 at 2014-12-09 19:33:17
http://wenku.baidu.com/link?url=Ab9xn-TSbAuhyDzKIGJTcjjiJqB7_tG6fZG--eiP6ErZ-xmACJsgfJEDiKtdBsdDtRJcwHbW7RmzQONslUHRsT4INpZK_Qi8bGzg8Nm37Y_这里就有，一般来说我加了GGAATTC，但是不建议楼主选用这个酶切位 ...

谢谢，太难切了是说加了七个碱基效率依然不高吗,用得哪个公司的酶?
赞一下 回复此楼
8楼2014-12-10 16:43:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

vito22

新虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
5楼: Originally posted by 意萧02 at 2014-12-10 15:42:22
加两三个够了，一般没啥影响，很多人加都没加，照样可以，所以不要太纠结这个问题，不放心就加两三个意思意思，加上去的最好跟序列能够匹配，这样结合率高点

谢谢提醒，对于大多数限制酶来说，“加两三个够了”，针对NdeI也是如此么？
赞一下 回复此楼
9楼2014-12-10 16:45:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

嘿小杨同志

金虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by vito22 at 2014-12-10 16:43:16
谢谢，太难切了是说加了七个碱基效率依然不高吗,用得哪个公司的酶?...

takara的，这个酶效率都不高楼主慎用啊。
赞一下 回复此楼
10楼2014-12-10 17:20:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 vito22 的主题更新
161/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 这年头没有找到涵评专家，还有中面上的可能吗 +11 dd921ww 2026-05-12 13/650 2026-05-16 09:16 by Howard28
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 l7k6xnh0yc 2026-05-14 4/200 2026-05-16 04:44 by k37jurhrau
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 l7k6xnh0yc 2026-05-14 5/250 2026-05-16 04:33 by k37jurhrau
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 l7k6xnh0yc 2026-05-14 5/250 2026-05-16 04:29 by k37jurhrau
[教师之家] 上海大学实验技术岗位非升即走 +5 嘻嘻哈哈乐呵呵 2026-05-15 5/250 2026-05-16 00:17 by caiyun
[文学芳草园] 窗边初夏的小雨 +8 阿美_Lml888 2026-05-09 11/550 2026-05-15 23:54 by WASM
[文学芳草园] 裁员滚滚，退居二线 +3 J_wei 2026-05-10 3/150 2026-05-15 22:52 by molecula
[论文投稿] 有带发论文的吗 +4 山楂之术 2026-05-09 4/200 2026-05-15 15:40 by 妹子不好惹
[文学芳草园] 风把牡丹吹跑了 +5 myrtle 2026-05-12 9/450 2026-05-15 15:27 by myrtle
[基金申请] 精华III:  评审感受-评审感受-评审感受 +14 ferrarichen 2026-05-11 18/900 2026-05-15 11:12 by cmhchen
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 l7k6xnh0yc 2026-05-14 3/150 2026-05-15 09:23 by onwj4wpxp2
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 cjf4bx70cj 2026-05-14 4/200 2026-05-15 09:03 by gagyerk94e
[教师之家] 教学课件你会给同学吗 +8 硕士研究生吗 2026-05-13 8/400 2026-05-14 22:23 by 常规沥青
[考博] 26应届毕业生考博求助 +3 wo一定上岸 2026-05-13 3/150 2026-05-14 21:47 by 明海天涯
[有机交流] 求助2，4-二氯-5-嘧啶甲醛的合成方法 20+3 光吃不拉 2026-05-14 5/250 2026-05-14 20:15 by 一切都是空工
[考博] 申博自荐 +4 食品的橙子 2026-05-09 6/300 2026-05-14 16:05 by great1919
[考博] 材料类只有一篇综述能申博么 +4 乐逍遥谷 2026-05-13 4/200 2026-05-14 12:05 by zhyzzh
[基金申请] 请问大佬b0816评完了吗 +3 市民华南虎 2026-05-12 7/350 2026-05-14 07:41 by 市民华南虎
[论文投稿] 求助大佬sci投稿哪个好中 +3 江沅188 2026-05-12 4/200 2026-05-13 14:35 by 江沅188
[考博] 现在不知道怎么办，感觉很痛苦 +4 qweww 2026-05-11 5/250 2026-05-11 20:23 by Oversize
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭