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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助各位大神有米有用过EcoRV限制性内切酶的~~~
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芒果布丁

木虫 (小有名气)

[求助] 求助各位大神有米有用过EcoRV限制性内切酶的~~~

RT...
我把目的基因连到T载上，用NdeI和EcoRV双酶切，比目的基因大两三百bp。。。用NdeI单酶切效果是完全一样的。。。用EcoRV单酶切切不出来。。。这是肿么回事啊。。。。求解答。。。。
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喵星人~
1楼 2011-12-04 18:02:02
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asznpb

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
西瓜(金币+1): 鼓励应助 2011-12-04 21:20:10
芒果布丁(金币+1): 2011-12-06 20:31:56
序列上有EcoRV位点么？ps，你仔细看看说明，单酶切和双酶切的buffer和体系都不大一样的，酶活也不同。
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显微镜下的世界很精彩！
2楼2011-12-04 21:07:32
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芒果布丁

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by asznpb at 2011-12-04 21:07:32:
序列上有EcoRV位点么？ps，你仔细看看说明，单酶切和双酶切的buffer和体系都不大一样的，酶活也不同。

我的序列上有的，两个酶都可以用Hbuffer的。。。
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喵星人~
3楼2011-12-06 20:32:30
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asznpb

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
西瓜(金币+1): 鼓励应助 2011-12-06 22:53:06
引用回帖:
3楼: Originally posted by 芒果布丁 at 2011-12-06 20:32:30:
我的序列上有的，两个酶都可以用Hbuffer的。。。

那可能是切得时间短了吧，看你的描述应该是慢酶吧，通用buffer双酶切活性降低了，你就慢酶过夜37℃切吧……
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显微镜下的世界很精彩！
4楼2011-12-06 21:20:18
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芒果布丁

木虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by asznpb at 2011-12-06 21:20:18:
那可能是切得时间短了吧，看你的描述应该是慢酶吧，通用buffer双酶切活性降低了，你就慢酶过夜37℃切吧……

那个，我切过16h的。。。
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喵星人~
5楼2011-12-07 09:01:43
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匿名

用户注销 (正式写手)
本帖仅楼主可见
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6楼2011-12-07 09:42:22
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c3024034

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

换其他实验室的酶试试，看是不是酶的问题
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7楼2011-12-07 18:47:12
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芒果布丁

木虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by c3024034 at 2011-12-07 18:47:12:
换其他实验室的酶试试，看是不是酶的问题

用相同的酶切我的表达空载，可以切的开啊。。。
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喵星人~
8楼2011-12-08 21:21:03
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芒果布丁

木虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by mengfei8336 at 2011-12-07 09:42:22:
你的两个酶是同一个公司产的吗？确定酶没有问题？酶切2小时和过夜都试一次

都是宝生物的~都试过了，还换过其他公司的还是不行。。。呜呜。。。我换酶切位点算了。。。
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喵星人~
9楼2011-12-20 13:18:12
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芒果布丁

木虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by c3024034 at 2011-12-07 18:47:12:
换其他实验室的酶试试，看是不是酶的问题

都试过了。。。哎。。。换位点好了。。。
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喵星人~
10楼2011-12-20 13:18:36
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