| 查看: 2958 | 回复: 6 | |||||||||
lianchen1218金虫 (正式写手)
|
[求助]
western blot小分子检测不出已有3人参与
|
|
最近在做细胞色素c cytochrome c的western blot,可是总是检测不出来，现在是和一个月之前同样的细胞系，同样的处理，同样的操作步骤，就是所用的东西都一样，可是就是检测不出来，之前都可以检测出来。 我的电泳条件是 15%的胶 60-70V浓缩胶，分离胶就100-120V，蛋白没有跑出来 转膜，4度 120V，90min; 110v,60min; 110V, 100min都试过 到丽春红染色的时候15-10KD的条带实验组就几乎没有，可是同样的一张膜上，阳性对照组在15-10KD又有明显的条带，而且上样量都一样。 缓冲液都没超过三次使用。 封闭5%牛奶，1h 二抗也是1h 显影的时候，有时候阳性对照都没有细胞色素C，但是有时候又有，不过实验组就一直没有。 我的细胞处理是 收集后离心，提取沉淀，用细胞分离液含0.01%digitonin，常温，15min，目的是分离细胞溶胶和其余的细胞器，因为cytochrome c是从线粒体释放到细胞溶胶的。 完全一样的操作，可是现在就是怎么都检测不到细胞色素c，一个月了，耽误了不少时间。请大家指导一下，可能是哪里出了问题？ 拜谢了！ |
回复此楼» 猜你喜欢
职称评审没过，求安慰
已经有14人回复
-
投稿Elsevier的Neoplasia杂志，到最后选publishing options时页面空白，不能完成投稿
已经有15人回复
-
毕业后当辅导员了，天天各种学生超烦
已经有4人回复
-
EST投稿状态问题
已经有4人回复
-
聘U V热熔胶研究人员
已经有10人回复
-
求助文献
已经有3人回复
-
垃圾破二本职称评审标准
已经有10人回复
-
投稿返修后收到这样的回复，还有希望吗
已经有8人回复
-
三无产品还有机会吗
已经有6人回复
-
谈谈两天一夜的“延安行”
已经有13人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 求助Western Blot实验条带没出现的原因分析及解决办法
已经有7人回复
- 想检测一个大约4kD 的小肽片段，western blot 一直没有条带怎么办
已经有21人回复
- western blot在加一抗之前最多封闭多久？
已经有17人回复
- Western Blot 目标条带跑不出来，内参条带清晰
已经有13人回复
- 如果WB做不出结果，该怎么判断是不是抗体的问题？
已经有6人回复
- 请教Western blot问题
已经有9人回复
- western blot中古怪的非特异性条带
已经有9人回复
- westernblot 目标蛋白无条带
已经有9人回复
- Western Blot结果 条带中间 不见了，请教高手！
已经有13人回复
- western blot 出不来结果！！！
已经有17人回复
- 未纯化血清抗体做western blot时，按多少比例稀释
已经有11人回复
- Western Blot出现问题
已经有19人回复
- 关于western blot的小问题
已经有12人回复
- Western Blot抗体选择
已经有8人回复
- 求助，Western-Blot转膜不成功
已经有22人回复
- western blot中蛋白质转印问题
已经有17人回复
- Western Blot实验的蛋白条带都连在一起
已经有37人回复
- 请教western blot 时蛋白稀释液情况
已经有4人回复
- western blot 求助，请高手指点一下
已经有8人回复
- 【求助/交流】western blot 缺带 断带
已经有21人回复
- 【求助/交流】western blot 一直都跑不出来，不知道原因，大侠给分析一下啊！？
已经有13人回复
- 原创首发：Tips for Western Blot-一些小技巧而已
已经有13人回复
fuyuandj86
版主 (著名写手)
己所不欲，勿施于人
- BioEPI: 1
- 应助: 397 (硕士)
- 贵宾: 0.015
- 金币: 7557.7
- 散金: 493
- 红花: 60
- 沙发: 2
- 帖子: 1312
- 在线: 1347.8小时
- 虫号: 544795
- 注册: 2008-04-13
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
- 管辖: 生物科学
【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
lianchen1218
金虫 (正式写手)
- 应助: 9 (幼儿园)
- 金币: 2086.6
- 散金: 197
- 红花: 17
- 帖子: 679
- 在线: 289.3小时
- 虫号: 1093159
- 注册: 2010-09-08
- 性别: MM
- 专业: 基础兽医学
【答案】应助回帖
【答案】应助回帖
lianchen1218
金虫 (正式写手)
- 应助: 9 (幼儿园)
- 金币: 2086.6
- 散金: 197
- 红花: 17
- 帖子: 679
- 在线: 289.3小时
- 虫号: 1093159
- 注册: 2010-09-08
- 性别: MM
- 专业: 基础兽医学