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金虫 (小有名气)

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[交流] 感受态制备遇到的问题

在制备感受态时，挑取无抗平板上的单菌落放置到含有无抗、氨苄、卡纳和状观霉素（实验室要用）的培养基中培养后，验证原始菌液没有被污染的情况下，接菌液至200mL培养基中，18摄氏度过夜摇至其OD值为0.55---0.6之间，按照分子克隆实验操作指南上的超级感受态制备方法进行制备。制备的感受态之后又重新涂到含有氨苄、卡纳和状观霉素的固体培养基平板上，却长出了单克隆。而且奇怪的是同时制作了几瓶感受态，用的材料都是一样，结果有两瓶出了问题，感受态涂抗生素平板时长出了克隆，而另外的四瓶没有出现此问题。

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1楼2014-12-01 14:53:37

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wangyanlq11

铜虫 (小有名气)

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kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-12-05 13:05:17

我最近也在做感受态，其实长出来挺正常的，我觉得可能有两方面的原因，第一就是楼上所说操作过程染菌，第二就是无抗平板上长的单菌落有的正常有的有抗性，而你刚好将无抗性的挑到含抗生素的培养基中，却将有问题的杂菌用来制备感受态，所以才会导致制备的感受态有抗性，所以无菌操作和每一步验证菌体的抗性非常非常重要

[ 发自小木虫客户端 ]