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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 感受态制备遇到的问题
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五维度的爱

金虫 (小有名气)

[交流] 感受态制备遇到的问题

在制备感受态时，挑取无抗平板上的单菌落放置到含有无抗、氨苄、卡纳和状观霉素（实验室要用）的培养基中培养后，验证原始菌液没有被污染的情况下，接菌液至200mL培养基中，18摄氏度过夜摇至其OD值为0.55---0.6之间，按照分子克隆实验操作指南上的超级感受态制备方法进行制备。制备的感受态之后又重新涂到含有氨苄、卡纳和状观霉素的固体培养基平板上，却长出了单克隆。而且奇怪的是同时制作了几瓶感受态，用的材料都是一样，结果有两瓶出了问题，感受态涂抗生素平板时长出了克隆，而另外的四瓶没有出现此问题。
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1楼 2014-12-01 14:53:37
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Neo2000

木虫 (著名写手)
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五维度的爱: 金币+1 2014-12-01 15:22:25
菌株都没得保证，做的感受态敢用？你就用最简单的氯化钙法就好，普通的连接转化还是没有问题的

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2楼2014-12-01 15:11:15
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五维度的爱

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-12-01 15:11:15
菌株都没得保证，做的感受态敢用？你就用最简单的氯化钙法就好，普通的连接转化还是没有问题的

菌株我们用的全式金，做感受之前我们都是验证过的，是没问题的呀
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3楼2014-12-01 15:22:21
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yangbin1

金虫 (正式写手)
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kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-12-05 13:05:07
制作感受态的过程中染菌了。
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4楼2014-12-01 15:49:39
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梦幻未碎

木虫 (小有名气)
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kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-12-05 13:05:12
可能是操作过程中带入的杂菌吧，用ok的做就好了～概率事件没关系的

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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开阔
5楼2014-12-02 14:12:12
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aotoulan

禁虫 (小有名气)
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五维度的爱(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-12-02 18:43:41
本帖内容被屏蔽
6楼2014-12-02 16:27:19
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wangyanlq11

铜虫 (小有名气)
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kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-12-05 13:05:17
我最近也在做感受态，其实长出来挺正常的，我觉得可能有两方面的原因，第一就是楼上所说操作过程染菌，第二就是无抗平板上长的单菌落有的正常有的有抗性，而你刚好将无抗性的挑到含抗生素的培养基中，却将有问题的杂菌用来制备感受态，所以才会导致制备的感受态有抗性，所以无菌操作和每一步验证菌体的抗性非常非常重要

[ 发自小木虫客户端 ]
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7楼2014-12-05 00:49:17
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