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感受态制备遇到的问题
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感受态制备遇到的问题
在制备感受态时,挑取无抗平板上的单菌落放置到含有无抗、氨苄、卡纳和状观霉素(实验室要用)的培养基中培养后,验证原始菌液没有被污染的情况下,接菌液至200mL培养基中,18摄氏度过夜摇至其OD值为0.55---0.6之间,按照分子克隆实验操作指南上的超级感受态制备方法进行制备。制备的感受态之后又重新涂到含有氨苄、卡纳和状观霉素的固体培养基平板上,却长出了单克隆。而且奇怪的是同时制作了几瓶感受态,用的材料都是一样,结果有两瓶出了问题,感受态涂抗生素平板时长出了克隆,而另外的四瓶没有出现此问题。
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2014-12-01 14:53:37
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菌株都没得保证,做的感受态敢用?你就用最简单的氯化钙法就好,普通的连接转化还是没有问题的
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2014-12-01 15:11:15
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2楼
:
Originally posted by
Neo2000
at 2014-12-01 15:11:15
菌株都没得保证,做的感受态敢用?你就用最简单的氯化钙法就好,普通的连接转化还是没有问题的
菌株我们用的全式金,做感受之前我们都是验证过的,是没问题的呀
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2014-12-01 15:22:21
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制作感受态的过程中染菌了。
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2014-12-01 15:49:39
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可能是操作过程中带入的杂菌吧,用ok的做就好了~概率事件没关系的
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2014-12-02 14:12:12
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2014-12-02 16:27:19
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wangyanlq11
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我最近也在做感受态,其实长出来挺正常的,我觉得可能有两方面的原因,第一就是楼上所说操作过程染菌,第二就是无抗平板上长的单菌落有的正常有的有抗性,而你刚好将无抗性的挑到含抗生素的培养基中,却将有问题的杂菌用来制备感受态,所以才会导致制备的感受态有抗性,所以无菌操作和每一步验证菌体的抗性非常非常重要
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7楼
2014-12-05 00:49:17
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