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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 感受态细胞制备
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wei_suzhen

新虫 (小有名气)

[求助] 感受态细胞制备 已有1人参与

用氯化钙制备感受态细胞时，怎样避免污染？注意事项是什么?
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1楼 2012-10-30 22:31:23
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

huangguoqing

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
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小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-10-31 15:16:14
个人意见，仅供参考！
1.氯化钙最好现用现配，尽量别用高温灭菌，过滤更好；
2.像你养细菌一样，注意就好，比如尽量不要手在瓶口上方活动，要用的东西放在一个地方，用过的地方放在另一个地方等等；
3.其实一般情况下，做感受态不会染菌的，就算染了，之后你用感受态做转化的时候也会被选择培养基平板的抗生素杀灭掉，这之前感受态都是放在超低温冰箱中的，杂菌也长不了；这温度要是真长了杂菌，麻烦把那个杂菌给我发一份，不胜感激！
4.像楼上说的，实践出真知，做几次就知道该注意哪些了。
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7楼2012-10-31 11:54:02
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cloudwin

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-10-31 15:16:01
1，氯化钙灭菌
2，在超净台中操作
3，各个步骤小心。
其实很多实验室都不是很仔细，如果你自己做一次成功了，你就知道怎么样了，知道注意事项了。实践中学，刚刚开始的顾虑和疑问就自然而然的消失了。祝顺利。
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wei_suzhen
2楼2012-10-31 01:36:13
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考研生涯

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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引用回帖:
4楼: Originally posted by dingxiuying at 2012-10-31 10:57:08
现在有很多公司直接卖做好的感受态，可以买来用用，省时省力也不贵。

连感受态都要购买，也太奢侈了吧，，，LZ，对于分子生物学的操作，在这边送你六个字个字，快速，连续，准确，即可达到理想的效果。
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5楼2012-10-31 11:01:41
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weigh1111

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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我个人做下来感觉是快与冷是最重要的，反而染菌是罕见的情况……
只要你摇的种子液没污染，基本上就不会污染，LB里面没有多少菌能竞争过大肠杆菌的。
影响效率的关键就在于配溶液的时候容器要洗干净，水用干净的水，尽量快地完成菌体洗涤分装冻存的步骤。
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wei_suzhen
8楼2012-10-31 17:06:04
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普通回帖

wei_suzhen

新虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by cloudwin at 2012-10-31 01:36:13
1，氯化钙灭菌
2，在超净台中操作
3，各个步骤小心。
其实很多实验室都不是很仔细，如果你自己做一次成功了，你就知道怎么样了，知道注意事项了。实践中学，刚刚开始的顾虑和疑问就自然而然的消失了。祝顺利。

谢谢
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3楼2012-10-31 09:49:28
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dingxiuying

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
现在有很多公司直接卖做好的感受态，可以买来用用，省时省力也不贵。
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我喜欢默默地被你注视默默地注视着你，我喜欢深深地被你爱着深深地爱着你
4楼2012-10-31 10:57:08
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cory0931

至尊木虫 (文坛精英)

巫山云

其实熟悉/了解了养细胞的过程/原理，这个不是什么问题。
问题是制备感受态细胞的原理；了解了原理性的东西，再做起来，就容易多了。
无菌观念是必须的；CaCl2的作用机制值得思考一下。
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锤之千古
6楼2012-10-31 11:37:41
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韩春歌

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我觉得做感受态按照步骤注意消毒手，器械，你开始用超净工作台的时候，可以比平时多消毒一会，把里面该清理的杂物清理一下，污染就解决了。个人觉得细菌生长浓度的测定才是最重要的，细菌长老了，或是浓度不够做出来的感受态活性都受影响，OD值在0.3-0.4之间，一定控制好这个浓度。
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9楼2012-11-01 08:52:43
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szylnl

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我们做感受态都是在普通实验桌上做的，一般都不会染菌的，主要是全程要保持低温环境。
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用百分之百的努力去做每件事
10楼2012-11-01 09:36:45
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