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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】求助：PXO99感受态的制备和电转化
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liuyuexinfei

木虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】求助：PXO99感受态的制备和电转化

PXO99是水稻白叶枯病菌的一个小种，革兰氏阴性菌。
   感受态的制备过程：用预冷的10%甘油洗涤四次，每次大约25ml,分装，-80度保藏。
   电转化过程：加1微升质粒到50微升感受态细胞中，轻轻混匀，冰预30min,用eppendorf  electroporator2510 型电转化仪和0.1cm eppendorf 的预冷电转化杯，1800v进行电击转化，接着用SOC进行恢复6h,涂板。
    可为什么一点都长不出来？
    请教各位大侠帮帮忙，不胜感激！
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我选择，我喜欢；我喜欢我的选择。
1楼 2010-08-18 12:53:17
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saintcecilia

木虫 (小有名气)
★ ★
amisking(金币+2):鼓励交流 2010-09-10 21:38:25
liuyuexinfei(金币+2): 2010-09-17 10:40:37
liuyuexinfei(金币+1): 2010-11-05 20:18:11
用SOC进行恢复6h？
这个时间是不是太长了啊？
不是都是45-60min吗？

当然最有可能的是没转上或是存活率低，另外感受态有没有问题？有没有做阴性和阳性对照？
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2010-09-10 21:11:19
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liuyuexinfei

木虫 (著名写手)
恢复时间长有影响吗？我做过存活率实验，感受态也应该没问题，也做过电压梯度，但一直没有结果，想问一下又没有可能是质粒的关系？
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3楼2010-09-17 10:48:49
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saintcecilia

木虫 (小有名气)
liuyuexinfei(金币+2): 2010-10-01 14:34:14
liuyuexinfei(金币+1): 2010-11-05 20:18:18
引用回帖:
Originally posted by saintcecilia at 2010-09-10 21:11:19:
用SOC进行恢复6h？
这个时间是不是太长了啊？
不是都是45-60min吗？

当然最有可能的是没转上或是存活率低，另外感受态有没有问题？有没有做阴性和阳性对照？

时间太长不好，这个是肯定的
但是具体多长时间是极限我也不知道

质粒的大小也是有关系的
一般来说
质粒越大，越不好转

我这段时间电转也不顺利
希望大家都能够快点儿做出好结果，加油！
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4楼2010-09-18 11:06:35
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沙砾

liuyuexinfei(金币+2): 2010-10-01 14:34:33
liuyuexinfei(金币+1): 2010-11-05 20:18:22
质粒大了就是不好转，我当时做电转也转了很多次，也做了很多次感受态，最后也没成功，长不出来。但当时我没有其它合适的质粒可以更换
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5楼2010-09-28 14:51:44
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liuyuexinfei

木虫 (著名写手)
正在努力中
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6楼2010-10-01 14:35:00
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