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zwt369

铜虫 (小有名气)

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[求助] 细胞上清中蛋白的纯化

最近在做细胞上清中的总蛋白纯化。
上清是有血清的，第一步用85%的硫酸铵沉淀（加固体），离心后沉淀溶解过G-25凝胶柱置换缓冲液、脱盐、除色。
这边有几个疑问，忘有经验的各位大侠能给解答
1. 细胞上清中有哪些跟蛋白无关的杂质？
2. 硫酸铵沉淀一般除去的是什么成分？（脂质？多糖？多肽？.....)
3. G-25除盐以后在盐峰后还有一个紫外吸收峰，不知道是什么成分（激素？氨基酸？），做过核酸电泳证实没有核酸。
4. 最后过柱完的蛋白样品检测还是有核酸，只是比初始上清中的减少一点，怎么去除核酸对蛋白没有损伤又不会混入污染物？
5. 粗纯化的步骤需要改进吗？是否第一步需要将核酸去除？

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