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细胞上清中蛋白的纯化
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最近在做细胞上清中的总蛋白纯化。 上清是有血清的,第一步用85%的硫酸铵沉淀(加固体),离心后沉淀溶解过G-25凝胶柱置换缓冲液、脱盐、除色。 这边有几个疑问,忘有经验的各位大侠能给解答 1. 细胞上清中有哪些跟蛋白无关的杂质? 2. 硫酸铵沉淀一般除去的是什么成分?(脂质?多糖?多肽?.....) 3. G-25除盐以后在盐峰后还有一个紫外吸收峰,不知道是什么成分(激素?氨基酸?),做过核酸电泳证实没有核酸。 4. 最后过柱完的蛋白样品检测还是有核酸,只是比初始上清中的减少一点,怎么去除核酸对蛋白没有损伤又不会混入污染物? 5. 粗纯化的步骤需要改进吗?是否第一步需要将核酸去除? |
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