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[交流]
探讨质粒快速提取的方法和单克隆快速鉴定 已有4人参与
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20141122更新： 现在本虫做菌落鉴定一般都是先做菌p，后挑菌提质粒酶切鉴定。感觉做下来耗时很长。逛了下论坛，感觉是不是可以直接摇菌，然后电泳菌液和空载。后根据电泳结果快速提质粒酶切鉴定。现在就是质粒快提方法还没定好。 大家有啥好的方法吗？只想快速鉴定单克隆是否正确。 ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~分割线~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ 首先声明，本虫只是想知道一下大家都有哪些快速提取质粒的方法，所以来开个帖子问问。  本虫一直在用的方法就是碱裂解法，一般溶液I（RNase A plus）、II、III后，氯仿抽提蛋白，后无水乙醇放-20沉淀20-30min。然后再用70%乙醇洗涤。晾干后，水回溶。 最近做原生质体的时候看到sheen lab有个10min质粒提取的方法，网址请猛戳：http://molbio.mgh.harvard.edu/sheenweb/protocols_reg.html。 英语不才就不在这里丢人啦…… 他的方法原理应该就是 苯酚/氯仿/异戊醇 抽提吧。RNA是用最后ddw（RNase）消除。 本虫搜索了下，也有人用水重悬菌体然后苯酚/氯仿/异戊醇抽提后异丙醇沉淀的。 所以，想问问大家，都在用啥快速提取质粒的方法。提取质量好，时间又比较短呢。请大家不吝赐教啦…… [ Last edited by conanyangqun on 2014-11-22 at 03:59 ] |
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