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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 质粒载体构建不成功
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小雒饕餮

新虫 (初入文坛)

[求助] 质粒载体构建不成功已有7人参与

质粒重组转入DH5α，多次不长斑 ，偶尔有斑后，PCR有带 ，酶切无带，怎么回事？求各位高手解答下，菜鸟我做了半年了好惆怅、、、、
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1楼2014-10-31 19:28:03
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dongdekun

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-11-04 22:42:23
8成是质粒重组的问题。
从重组质粒开始，仔细检查每一步试验，限制性内切酶？平末端/粘性末端？质粒/目的基因摩尔比？抗生素种类/用量？
PCR假阳性很普遍，作为初筛可以，最终结果以酶切和测序为准。
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3楼2014-11-02 13:21:26
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yuguiyan

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-10-31 22:26:20
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-10-31 23:10:31
酶切无带说明根本没连上吧，pcr很可能只是假阳性

[ 发自小木虫客户端 ]
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2楼2014-10-31 19:37:30
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★
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小雒饕餮(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-11-24 19:07:42
酶切没带的话估计是没连上，你再试着连一下吧
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···
4楼2014-11-02 14:34:47
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小雒饕餮

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yuguiyan at 2014-10-31 19:37:30
酶切无带说明根本没连上吧，pcr很可能只是假阳性

我认为也是连接出了问题，但是就是找不到解决办法
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5楼2014-11-03 20:08:31
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