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问一个有关设计PCR优化体系实验的问题
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初次接触分子，如果一下用词有误，请勿喷。。。 还请多多指教 正题，想设计一个优化EST-PCR体系的正交试验 问题1：先确定反应体系各组分用量？还是先确定各组分浓度？ 在查阅的文章中，一般都是先设计(筛选最优的) 各组分浓度的 正交试验。那各部分用量怎么确定？一般都没有说明，随便确定一个还是怎样。于是我糊涂了。。。。囧 问题2：如果先设计浓度的试验，之后需要分别设计用量的实验吗？ 例如：A*B，B*C...E*A，这A~E 5个因素彼此的用量~ 问题3：（小白问题）诸如Mg离子浓度（1.5mM/L）、dNTP浓度(2.5mM/L)、引物浓度(0.1~0.5mM/L)和TaqDNA聚合酶浓度（5U/μL），是它们在当下反应体系中的浓度吗？ 1.5mM/L 和1.5mM/μL 哪个对啊？？？？ 系不系从试剂公司买回来的，需要自己最后稀释还是？？？完全懵懵的状态~~~~ TAT |
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