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小小一枚

新虫 (初入文坛)

[求助] 质粒降解严重 已有3人参与

我在连接产物导入DH5α之后挑转化子验证,提出的质粒酶切验证出现弥散带,但是质粒第二天就降解没了,这会是什么原因啊,请各位大神帮忙
第一张是当天酶切的图;第二张是第二天酶切的图,marker后面是原始质粒。

质粒降解严重
2014-10-23 .gif


质粒降解严重-1
2014-10-24 .gif
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小小一枚

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 王平阳 at 2014-10-26 09:05:43
你确定你的质粒提取出来了?看图上没有条带啊,你最好先搞清楚质粒有没有提取出来再考虑酶切的问题,把提取出来的质粒测一个浓度,再跑一个电泳,看看效果如何,之后再分别用菌液质粒做模板做一个PCR验证,确保质粒 ...

我提出来了,这个图片传上来不清晰,主要是提出的质粒放在-20℃一晚上就降解了
5楼2014-10-27 14:25:32
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caihang

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
小小一枚(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-10-26 20:53:04
这个问题我也曾经碰到过过。试试用其他的酶切切看,buffer 也换换,然后对比看是不是还会出现这个情况。
2楼2014-10-25 22:20:23
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王平阳

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小小一枚(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-10-26 20:53:13
你确定你的质粒提取出来了?看图上没有条带啊,你最好先搞清楚质粒有没有提取出来再考虑酶切的问题,把提取出来的质粒测一个浓度,再跑一个电泳,看看效果如何,之后再分别用菌液质粒做模板做一个PCR验证,确保质粒是提取出来了的
没有做不到,只有想不到!
3楼2014-10-26 09:05:43
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小小一枚

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by caihang at 2014-10-25 22:20:23
这个问题我也曾经碰到过过。试试用其他的酶切切看,buffer 也换换,然后对比看是不是还会出现这个情况。

我已经换过了,但还是降解
4楼2014-10-27 14:23:56
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