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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 质粒降解严重
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小小一枚

新虫 (初入文坛)

[求助] 质粒降解严重 已有3人参与

我在连接产物导入DH5α之后挑转化子验证，提出的质粒酶切验证出现弥散带，但是质粒第二天就降解没了，这会是什么原因啊，请各位大神帮忙
第一张是当天酶切的图；第二张是第二天酶切的图，marker后面是原始质粒。

质粒降解严重
2014-10-23 .gif


质粒降解严重-1
2014-10-24 .gif
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1楼 2014-10-25 16:33:27
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caihang

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小小一枚(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-10-26 20:53:04
这个问题我也曾经碰到过过。试试用其他的酶切切看，buffer 也换换，然后对比看是不是还会出现这个情况。
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2楼2014-10-25 22:20:23
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王平阳

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小小一枚(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-10-26 20:53:13
你确定你的质粒提取出来了？看图上没有条带啊，你最好先搞清楚质粒有没有提取出来再考虑酶切的问题，把提取出来的质粒测一个浓度，再跑一个电泳，看看效果如何，之后再分别用菌液质粒做模板做一个PCR验证，确保质粒是提取出来了的
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没有做不到，只有想不到！
3楼2014-10-26 09:05:43
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小小一枚

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by caihang at 2014-10-25 22:20:23
这个问题我也曾经碰到过过。试试用其他的酶切切看，buffer 也换换，然后对比看是不是还会出现这个情况。

我已经换过了，但还是降解
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4楼2014-10-27 14:23:56
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小小一枚

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 王平阳 at 2014-10-26 09:05:43
你确定你的质粒提取出来了？看图上没有条带啊，你最好先搞清楚质粒有没有提取出来再考虑酶切的问题，把提取出来的质粒测一个浓度，再跑一个电泳，看看效果如何，之后再分别用菌液质粒做模板做一个PCR验证，确保质粒 ...

我提出来了，这个图片传上来不清晰，主要是提出的质粒放在-20℃一晚上就降解了
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5楼2014-10-27 14:25:32
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你是不是没有提出来啊，上面两张图片上除了marker以外，没有其他带啊，你再重新提吧···
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···
6楼2014-10-27 14:58:52
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