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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 硫铵沉淀蛋白质没有沉淀是怎么回事
汕头大学海洋科学接受调剂
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zzx1123

铁虫 (初入文坛)

[求助] 硫铵沉淀蛋白质没有沉淀是怎么回事 已有2人参与

我目前纯化真菌漆酶，加固体硫酸铵至35％，由于搅拌过于剧烈导致大量泡沫产生，但沉淀一段时间后没有任何沉淀，请问这是不是由于搅拌剧烈或局部硫酸铵浓度过高导致蛋白质变性造成的，还是有其他需要注意的地方，我是刚开始做这个，很多都不太懂，请各位大神指教

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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don'tgiveup
1楼 2014-10-24 20:04:49
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liuderong

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
zzx1123(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-10-26 20:56:21
有些蛋白对硫铵不敏感，35%的硫铵可能沉不下来。
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2楼2014-10-25 13:13:45
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天地一微尘

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
zzx1123(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-10-26 20:56:36
盐析沉淀蛋白质与蛋白质分子量有关，你最好先查一下该蛋白分子量，是否以前沉淀过？
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3楼2014-10-25 20:04:19
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a1057194600

新虫 (初入文坛)
一般不建议直接用固体磷酸铵来沉淀，原因就如你说的。我的方法是先配置饱和磷酸铵溶液，用样品体积和饱和硫酸铵体积来换算，得到你想要的一定浓度磷酸铵，在此过程中用滴定管来缓慢滴定的。样品中磷酸铵浓度的缓慢升高到你想要的浓度，不会引起蛋白质的变性。
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4楼2014-11-02 10:55:48
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