应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 为什么pET载体要有lac操纵子？？？
51/1返回列表
查看: 8930  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

xissy

铜虫 (小有名气)

[求助] 为什么pET载体要有lac操纵子？？？ 已有1人参与

有的pET载体有lac操纵子，例如实验室最常用的pET28a，也有的pET载体没有lac操纵子，例如pET17b。我不是特别明白这里lac操纵子的意义，姑且解释一下，请各位大侠指正下。
     lac操纵子紧邻T7启动子的下游，它带有常规启动子和可以编码lac阻遏蛋白的序列。lac阻遏蛋白一方面作用于宿主染色体lacUV5启动子，抑制宿主聚合酶转录T7 RNA聚合酶，一方面也作用于载体本身的T7启动子，最终的目的在于阻断任何形式的T7 RNA聚合酶导致的目的基因的转录。诱导时加入IPTG，IPTG是乳糖类似物，可以与阻遏蛋白lacI结合，改变其结构，从而激活转录。也就是说如果pET载体没有lac操纵子，其本底表达会比较严重。
     是这样解释的吗？？？
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

分子生化实验经验积累 分子生物学 分子生物知识 蛋白表达纯化鉴定精华

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-10-19 15:29:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

602059625

金虫 (知名作家)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-10-19 23:34:05
赞一下 回复此楼
[url=http://ip.WoTuLa.com][img]http://i.WoTuLa.com/note.png?name=填写姓名&say=这里填写您想说的内容。[/img][/url]
5楼2014-10-19 20:17:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

602059625

金虫 (知名作家)
★ ★ ★
gyesang: 金币+3, 鼓励交流！ 2014-10-19 23:30:38
为了降低basal expression，pET28载体上T7启动子的下游还加了一段lac operator序列
pET载体表达需要有IPTG诱导，以解除对基因组上lacUV5启动子的阻遏，以及pET载体上lac operator的阻遏



来源：pET system manual
          http://www.emdmillipore.com/life ... s1O77QAAAEhPqsLdcab
基因组上的lacUV5启动子控制T7 RNA polymerase gene的表达

来源：http://www.emdmillipore.com/showBrochure/201001.195.ProNet.pdf
另外pET28载体上还有一个组成型表达的lacI基因，其作用是增加lacI阻遏物的表达量，因为pET28载体以多拷贝存在，仅靠基因组上的lacI基因无法产生足够多的lacI阻遏物

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
[url=http://ip.WoTuLa.com][img]http://i.WoTuLa.com/note.png?name=填写姓名&say=这里填写您想说的内容。[/img][/url]
2楼2014-10-19 19:10:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

luca5s

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+3, 鼓励交流！ 2014-10-19 23:31:17
xissy: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-10-20 21:33:11
如果没有阻遏蛋白，那么菌液就会自己表达，那么，表达的蛋白会影响菌的活性，更重要的是，表达的话，就无法进行传代扩增培养了。有这样一个调控，是非常方便而且实用的，在我们需要的时候才能进行表达。
赞一下 回复此楼
咳咳
3楼2014-10-19 19:57:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

602059625

金虫 (知名作家)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-10-19 23:33:38
为了降低basal expression，pET28载体上T7启动子的下游还加了一段lac operator序列
pET载体表达需要有IPTG诱导，以解除对基因组上lacUV5启动子的阻遏，以及pET载体上lac operator的阻遏



来源：pET system manual
          http://www.emdmillipore.com/life ... s1O77QAAAEhPqsLdcab
基因组上的lacUV5启动子控制T7 RNA polymerase gene的表达
http://image.keyan.cc/data/bcs/2 ... _1399474503_469.png
来源：http://www.emdmillipore.com/showBrochure/201001.195.ProNet.pdf
另外pET28载体上还有一个组成型表达的lacI基因，其作用是增加lacI阻遏物的表达量，因为pET28载体以多拷贝存在，仅靠基因组上的lacI基因无法产生足够多的lacI阻遏物
赞一下(1人) 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

xissy
[url=http://ip.WoTuLa.com][img]http://i.WoTuLa.com/note.png?name=填写姓名&say=这里填写您想说的内容。[/img][/url]
4楼2014-10-19 20:16:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭