| 查看: 9011 | 回复: 8 | ||||||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||||||
[求助]
为什么pET载体要有lac操纵子？？？ 已有1人参与
|
||||||
|
有的pET载体有lac操纵子，例如实验室最常用的pET28a，也有的pET载体没有lac操纵子，例如pET17b。我不是特别明白这里lac操纵子的意义，姑且解释一下，请各位大侠指正下。 lac操纵子紧邻T7启动子的下游，它带有常规启动子和可以编码lac阻遏蛋白的序列。lac阻遏蛋白一方面作用于宿主染色体lacUV5启动子，抑制宿主聚合酶转录T7 RNA聚合酶，一方面也作用于载体本身的T7启动子，最终的目的在于阻断任何形式的T7 RNA聚合酶导致的目的基因的转录。诱导时加入IPTG，IPTG是乳糖类似物，可以与阻遏蛋白lacI结合，改变其结构，从而激活转录。也就是说如果pET载体没有lac操纵子，其本底表达会比较严重。 是这样解释的吗？？？ |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 分子生化实验经验积累 | 分子生物学 | 分子生物知识 | 蛋白表达纯化鉴定精华 |
» 猜你喜欢
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有99人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
-
留学--博士招生
已经有5人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有2人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- PET28载体的T7启动子是T7还是T7lac启动子？表达时需不需要IPTG诱导？
已经有6人回复
- 请问IPTG是通过什么途径进入细胞内，而发生诱导的呢
已经有11人回复
- 原核表达载体构建- 遇到的一些问题···
已经有5人回复
- 利用PET-28b构建重组载体时将目的基因插在lac I基因中的酶切位点可以么
已经有4人回复
- PET-28a载体怎么解读
已经有7人回复
- 利用NCBI,查询乳酸乳球菌的乳糖操纵子中的Lac A 基因启动子序列
已经有8人回复
- 无IPTG诱导蛋白依然很好表达
已经有13人回复
- pET20b是否含有lac operator序列
已经有5人回复
- 串联表达的问题
已经有13人回复
- 【求助/交流】十万火急，IPTG诱导是怎么回事，给我说个大概
已经有9人回复
- 【求助/交流】大肠杆菌BL21的问题
已经有4人回复
- 【求助/交流】原核表达载体pGEX-4T-1对应的表达菌株
已经有6人回复
- 【求助/交流】LB培养基的成分及成分差异的问题
已经有11人回复
602059625
金虫 (知名作家)
- MolEPI: 2
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 1541.8
- 散金: 1236
- 红花: 59
- 沙发: 23
- 帖子: 7530
- 在线: 4557.6小时
- 虫号: 1025998
- 注册: 2010-05-22
- 性别: GG
- 专业: 地球内部物理学
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-10-19 23:33:38
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-10-19 23:33:38
|
为了降低basal expression，pET28载体上T7启动子的下游还加了一段lac operator序列 pET载体表达需要有IPTG诱导，以解除对基因组上lacUV5启动子的阻遏，以及pET载体上lac operator的阻遏    来源：pET system manual http://www.emdmillipore.com/life ... s1O77QAAAEhPqsLdcab 基因组上的lacUV5启动子控制T7 RNA polymerase gene的表达 http://image.keyan.cc/data/bcs/2 ... _1399474503_469.png 来源：http://www.emdmillipore.com/showBrochure/201001.195.ProNet.pdf 另外pET28载体上还有一个组成型表达的lacI基因，其作用是增加lacI阻遏物的表达量，因为pET28载体以多拷贝存在，仅靠基因组上的lacI基因无法产生足够多的lacI阻遏物 |
xissy
4楼2014-10-19 20:16:13
602059625
金虫 (知名作家)
- MolEPI: 2
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 1541.8
- 散金: 1236
- 红花: 59
- 沙发: 23
- 帖子: 7530
- 在线: 4557.6小时
- 虫号: 1025998
- 注册: 2010-05-22
- 性别: GG
- 专业: 地球内部物理学
★ ★ ★
gyesang: 金币+3, 鼓励交流！ 2014-10-19 23:30:38
gyesang: 金币+3, 鼓励交流！ 2014-10-19 23:30:38
|
为了降低basal expression，pET28载体上T7启动子的下游还加了一段lac operator序列 pET载体表达需要有IPTG诱导，以解除对基因组上lacUV5启动子的阻遏，以及pET载体上lac operator的阻遏 来源：pET system manual http://www.emdmillipore.com/life ... s1O77QAAAEhPqsLdcab 基因组上的lacUV5启动子控制T7 RNA polymerase gene的表达 来源：http://www.emdmillipore.com/showBrochure/201001.195.ProNet.pdf 另外pET28载体上还有一个组成型表达的lacI基因，其作用是增加lacI阻遏物的表达量，因为pET28载体以多拷贝存在，仅靠基因组上的lacI基因无法产生足够多的lacI阻遏物 [ 发自手机版 http://muchong.com/3g ] |
2楼2014-10-19 19:10:38
3楼2014-10-19 19:57:40
602059625
金虫 (知名作家)
- MolEPI: 2
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 1541.8
- 散金: 1236
- 红花: 59
- 沙发: 23
- 帖子: 7530
- 在线: 4557.6小时
- 虫号: 1025998
- 注册: 2010-05-22
- 性别: GG
- 专业: 地球内部物理学
5楼2014-10-19 20:17:08
6