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为什么pET载体要有lac操纵子？？？ 已有1人参与
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有的pET载体有lac操纵子，例如实验室最常用的pET28a，也有的pET载体没有lac操纵子，例如pET17b。我不是特别明白这里lac操纵子的意义，姑且解释一下，请各位大侠指正下。 lac操纵子紧邻T7启动子的下游，它带有常规启动子和可以编码lac阻遏蛋白的序列。lac阻遏蛋白一方面作用于宿主染色体lacUV5启动子，抑制宿主聚合酶转录T7 RNA聚合酶，一方面也作用于载体本身的T7启动子，最终的目的在于阻断任何形式的T7 RNA聚合酶导致的目的基因的转录。诱导时加入IPTG，IPTG是乳糖类似物，可以与阻遏蛋白lacI结合，改变其结构，从而激活转录。也就是说如果pET载体没有lac操纵子，其本底表达会比较严重。 是这样解释的吗？？？ |
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3楼2014-10-19 19:57:40
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gyesang: 金币+3, 鼓励交流！ 2014-10-19 23:30:38
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为了降低basal expression，pET28载体上T7启动子的下游还加了一段lac operator序列 pET载体表达需要有IPTG诱导，以解除对基因组上lacUV5启动子的阻遏，以及pET载体上lac operator的阻遏 来源：pET system manual http://www.emdmillipore.com/life ... s1O77QAAAEhPqsLdcab 基因组上的lacUV5启动子控制T7 RNA polymerase gene的表达 来源：http://www.emdmillipore.com/showBrochure/201001.195.ProNet.pdf 另外pET28载体上还有一个组成型表达的lacI基因，其作用是增加lacI阻遏物的表达量，因为pET28载体以多拷贝存在，仅靠基因组上的lacI基因无法产生足够多的lacI阻遏物 [ 发自手机版 http://muchong.com/3g ] |
2楼2014-10-19 19:10:38
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为了降低basal expression，pET28载体上T7启动子的下游还加了一段lac operator序列 pET载体表达需要有IPTG诱导，以解除对基因组上lacUV5启动子的阻遏，以及pET载体上lac operator的阻遏    来源：pET system manual http://www.emdmillipore.com/life ... s1O77QAAAEhPqsLdcab 基因组上的lacUV5启动子控制T7 RNA polymerase gene的表达 http://image.keyan.cc/data/bcs/2 ... _1399474503_469.png 来源：http://www.emdmillipore.com/showBrochure/201001.195.ProNet.pdf 另外pET28载体上还有一个组成型表达的lacI基因，其作用是增加lacI阻遏物的表达量，因为pET28载体以多拷贝存在，仅靠基因组上的lacI基因无法产生足够多的lacI阻遏物 |
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xissy4楼2014-10-19 20:16:13
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