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rainy1230

新虫 (初入文坛)

[求助] 小提遇到的大问题 已有2人参与

找公司合成了一个质粒,就插入了一段eGFP,现在小提,加P3离心后沉淀不了(一般4ml的菌液),就算反复离心后取得上清,最后提出的质粒浓度也非常低,不到100.(我平时小提浓度都在1000左右)。现在不知道什么原因,问公司,他们说他们做了小提能提出质粒。万能的论坛,急求,帮我分析下可能的原因,谢谢!

小提遇到的大问题
质粒.jpg
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happydove

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
rainy1230(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-10-17 15:50:42
不知道你在哪个公司合的  我知道一家公司  她们提供10ug的质粒还有200ul的甘油菌
初步判断你的可能是污染或者质粒有问题
建议你涂板  然后挑单克隆  鉴定  如果是阳性的  再提一下看看
2楼2014-10-17 14:10:36
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rainy1230

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by happydove at 2014-10-17 14:10:36
不知道你在哪个公司合的  我知道一家公司  她们提供10ug的质粒还有200ul的甘油菌
初步判断你的可能是污染或者质粒有问题
建议你涂板  然后挑单克隆  鉴定  如果是阳性的  再提一下看看

涂过几次板,是阳性。但是摇菌以后还是提不出来,都是一样的问题,加入P3离心后沉淀不了。
3楼2014-10-17 14:21:19
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yesucao

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
如果你鉴定过是阳性的话,那可能是你提质粒的问题,将溶液2换一下试试吧!可能氢氧化钠的问题比较大。
4楼2014-10-17 17:24:23
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