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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 小提遇到的大问题
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rainy1230

新虫 (初入文坛)

[求助] 小提遇到的大问题 已有2人参与

找公司合成了一个质粒，就插入了一段eGFP，现在小提，加P3离心后沉淀不了（一般4ml的菌液），就算反复离心后取得上清，最后提出的质粒浓度也非常低，不到100.（我平时小提浓度都在1000左右）。现在不知道什么原因，问公司，他们说他们做了小提能提出质粒。万能的论坛，急求，帮我分析下可能的原因，谢谢！

小提遇到的大问题
质粒.jpg
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1楼 2014-10-17 12:52:51
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happydove

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
rainy1230(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-10-17 15:50:42
不知道你在哪个公司合的  我知道一家公司  她们提供10ug的质粒还有200ul的甘油菌
初步判断你的可能是污染或者质粒有问题
建议你涂板  然后挑单克隆  鉴定  如果是阳性的  再提一下看看
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2楼2014-10-17 14:10:36
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rainy1230

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by happydove at 2014-10-17 14:10:36
不知道你在哪个公司合的  我知道一家公司  她们提供10ug的质粒还有200ul的甘油菌
初步判断你的可能是污染或者质粒有问题
建议你涂板  然后挑单克隆  鉴定  如果是阳性的  再提一下看看

涂过几次板，是阳性。但是摇菌以后还是提不出来，都是一样的问题，加入P3离心后沉淀不了。
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3楼2014-10-17 14:21:19
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yesucao

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
如果你鉴定过是阳性的话，那可能是你提质粒的问题，将溶液2换一下试试吧！可能氢氧化钠的问题比较大。
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4楼2014-10-17 17:24:23
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