24小时热门版块排行榜    

查看: 5560  |  回复: 16

听海lwj

铜虫 (初入文坛)

[求助] Native非变性凝胶电泳,marker没跑开。。 已有1人参与

各位大侠,第一次跑native非变性凝胶电泳,12%分离胶,5%浓缩胶。
       12%分离胶跑SDS-PAGE分离的很好。为什么native不行呢?不太会分析,看图是不是marker没跑开?

Native非变性凝胶电泳,marker没跑开。。
2014-9-27.jpg


Native非变性凝胶电泳,marker没跑开。。-1
2014-9-27_副本.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

Justdoit!!
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lpzl

木虫 (正式写手)

楼主native非变性凝胶电泳是怎么做的呢?我最近也想做,看了好多资料不知从何下手啊。。
Start_everyday_with_a_new_hope,_leave_bad_memories...
2楼2014-09-28 16:31:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lcqyp

金虫 (正式写手)

★ ★ ★
听海lwj(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-09-29 19:47:20
引用回帖:
2楼: Originally posted by lpzl at 2014-09-28 16:31:45
楼主native非变性凝胶电泳是怎么做的呢?我最近也想做,看了好多资料不知从何下手啊。。

非变性聚丙烯酰胺凝胶和变性SDS-PAGE电泳在操作上基本上是相同的,只是非变性聚丙烯酰胺凝胶的配制和电泳缓冲液中不能含有变性剂如SDS等。一般蛋白进行非变性凝胶电泳要先分清是碱性还是酸性蛋白。分离碱性蛋白时候,要利用低pH凝胶系统,分离酸性蛋白时候,要利用高pH凝胶系统。 酸性蛋白通常在非变性凝胶电泳中采用的pH是8.8的缓冲系统,蛋白会带负电荷,蛋白会向阳极移动;而碱性蛋白通常电泳是在微酸性环境下进行,蛋白带正电荷,这时候需要将阴极和阳76极倒置才可以电泳分离碱性蛋白。
改变心路,才能改变出路。
3楼2014-09-29 08:44:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lcqyp

金虫 (正式写手)

我最近也在跑native胶,我用的是10%的胶,但是老跑不开,也不知道原因
改变心路,才能改变出路。
4楼2014-09-29 08:46:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lpzl

木虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by lcqyp at 2014-09-29 08:46:40
我最近也在跑native胶,我用的是10%的胶,但是老跑不开,也不知道原因

嗯,我找到一本书,好像是蛋白质生物技术,按照上面的先试试吧。。。楼主跑不开,可以跑久点试试...

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

Start_everyday_with_a_new_hope,_leave_bad_memories...
5楼2014-09-29 11:20:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lcqyp

金虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by lpzl at 2014-09-29 11:20:05
嗯,我找到一本书,好像是蛋白质生物技术,按照上面的先试试吧。。。楼主跑不开,可以跑久点试试......

请教了师姐,说是可能是蛋白的等电点太偏中性了,建议我加G250试试,祝你好运
改变心路,才能改变出路。
6楼2014-09-29 17:01:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lpzl

木虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by lcqyp at 2014-09-29 17:01:17
请教了师姐,说是可能是蛋白的等电点太偏中性了,建议我加G250试试,祝你好运...

学习了....有机会再交流学习哈
Start_everyday_with_a_new_hope,_leave_bad_memories...
7楼2014-09-30 09:43:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

听海lwj

铜虫 (初入文坛)

送红花一朵
引用回帖:
5楼: Originally posted by lpzl at 2014-09-29 11:20:05
嗯,我找到一本书,好像是蛋白质生物技术,按照上面的先试试吧。。。楼主跑不开,可以跑久点试试......

是不是把分离胶浓度调低点就好点了呢,marker就能跑开?弱弱问一下,两个浓度的分离胶能一块跑吗?

[ 发自小木虫客户端 ]
Justdoit!!
8楼2014-09-30 09:54:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

牛焕杰

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你能说一下你的native胶是怎么跑的吗?配方是什么呢?是不是只在SDS-PAGE中不加SDS啊?还有native胶需要点marker吗?它是按电荷和分子量分开的,点marker没用啊
9楼2014-10-08 21:16:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

听海lwj

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
9楼: Originally posted by 牛焕杰 at 2014-10-08 21:16:17
你能说一下你的native胶是怎么跑的吗?配方是什么呢?是不是只在SDS-PAGE中不加SDS啊?还有native胶需要点marker吗?它是按电荷和分子量分开的,点marker没用啊

对的,在配胶和缓冲液中都不加SDS便可,一般来说marker是不必要的额~
Justdoit!!
10楼2014-10-10 15:52:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 听海lwj 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] FileCode能看出啥? +8 要乐观耀哥 2026-08-10 26/1300 2026-08-13 12:01 by Tide man
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +9 majunge000 2026-08-10 11/550 2026-08-13 10:40 by ZH远山
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +9 瞬息宇宙 2026-08-12 9/450 2026-08-13 10:12 by Vivilian
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +22 Lanmanbaby 2026-08-09 36/1800 2026-08-12 22:50 by sdfapple719
[基金申请] 好奇怪的filecode +5 布布和一二 2026-08-08 6/300 2026-08-12 16:11 by 云上清扬
[论文投稿] 职称评审,求友友推荐见刊最快的期刊 +4 工厂打螺丝 2026-08-08 4/200 2026-08-12 09:18 by hansi2025
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +7 布布和一二 2026-08-10 10/500 2026-08-12 09:12 by 布布和一二
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分? +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +3 yuleib84 2026-08-11 3/150 2026-08-11 21:53 by jnhyjjm
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +8 Tide man 2026-08-10 9/450 2026-08-11 20:39 by beefly
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 听说今天filecode变了 +26 布布和一二 2026-08-06 49/2450 2026-08-11 13:18 by WH3796
[基金申请] 基金中了 +15 laoda193707 2026-08-06 15/750 2026-08-11 00:11 by jiafei2190
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +11 布布和一二 2026-08-08 22/1100 2026-08-10 11:10 by wmfsnow
[基金申请] fileCode有新解读? +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制,评价高的钱多评价低的钱少,但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[基金申请] 固定端突然变了,今天 +6 archvillain 2026-08-06 10/500 2026-08-07 16:03 by 医学老男孩
信息提示
请填处理意见