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听海lwj

铜虫 (初入文坛)

[求助] Native非变性凝胶电泳，marker没跑开。。 已有1人参与

各位大侠，第一次跑native非变性凝胶电泳，12%分离胶，5%浓缩胶。
       12%分离胶跑SDS-PAGE分离的很好。为什么native不行呢？不太会分析，看图是不是marker没跑开？

Native非变性凝胶电泳，marker没跑开。。
2014-9-27.jpg


Native非变性凝胶电泳，marker没跑开。。-1
2014-9-27_副本.jpg
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Justdoit!!
1楼 2014-09-28 11:26:32
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lcqyp

金虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by lpzl at 2014-09-29 11:20:05
嗯，我找到一本书，好像是蛋白质生物技术，按照上面的先试试吧。。。楼主跑不开，可以跑久点试试......

请教了师姐，说是可能是蛋白的等电点太偏中性了，建议我加G250试试，祝你好运
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改变心路，才能改变出路。
6楼2014-09-29 17:01:17
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lpzl

木虫 (正式写手)
楼主native非变性凝胶电泳是怎么做的呢？我最近也想做，看了好多资料不知从何下手啊。。
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Start_everyday_with_a_new_hope,_leave_bad_memories...
2楼2014-09-28 16:31:45
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lcqyp

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
听海lwj(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-09-29 19:47:20
引用回帖:
2楼: Originally posted by lpzl at 2014-09-28 16:31:45
楼主native非变性凝胶电泳是怎么做的呢？我最近也想做，看了好多资料不知从何下手啊。。

非变性聚丙烯酰胺凝胶和变性SDS-PAGE电泳在操作上基本上是相同的，只是非变性聚丙烯酰胺凝胶的配制和电泳缓冲液中不能含有变性剂如SDS等。一般蛋白进行非变性凝胶电泳要先分清是碱性还是酸性蛋白。分离碱性蛋白时候，要利用低pH凝胶系统，分离酸性蛋白时候，要利用高pH凝胶系统。 酸性蛋白通常在非变性凝胶电泳中采用的pH是8.8的缓冲系统，蛋白会带负电荷，蛋白会向阳极移动；而碱性蛋白通常电泳是在微酸性环境下进行，蛋白带正电荷，这时候需要将阴极和阳76极倒置才可以电泳分离碱性蛋白。
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改变心路，才能改变出路。
3楼2014-09-29 08:44:40
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lcqyp

金虫 (正式写手)
我最近也在跑native胶，我用的是10%的胶，但是老跑不开，也不知道原因
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改变心路，才能改变出路。
4楼2014-09-29 08:46:40
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