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烨火赤心

铜虫 (小有名气)

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专业: 动物遗传学

[求助] 鸡血DNA提取已有10人参与

各位好，我最近要提取鸡血DNA，但血液已经在-20度放置好几个月了，还能用么？另外我用的是肝素钠抗凝管，后来发现提取的血液样品已经有一部分凝血了，如果要用凝血块提DNA除了液氮研磨还有其他的办法么？还有就是鸡血DNA提取出来的正常浓度应该是多少呢？
急急急！！！！！！

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烨火赤心

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1楼 2014-09-24 00:07:24

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就会提核酸

铜虫 (初入文坛)

应助: 6 (幼儿园)
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虫号: 3451528
注册: 2014-10-01
专业: 蛋白质组学

【答案】应助回帖

1：用力晃动保存管，使凝血部分分离。
2：移取少许到离心管中，离心弃上清。
3：一般 5ul 细胞沉淀可获得不少于 20ug 的 DNA。如果沉淀小于预期，补加样品后再离心弃上清；如果沉淀多于预期，加入少许水，顺势抽打悬浮后，吸出多于的 (预估即可)，再离心弃上清。
4：可以使用任何细胞 DNA 抽提的方法抽提。

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8楼2014-10-01 14:05:40

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Mynameisju

新虫 (初入文坛)

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注册: 2014-09-12

【答案】应助回帖

鸡血血细胞是有核细胞，即有核酸的细胞，人血基因组提取的是血细胞中的白细胞和一些尚未成熟的有核红细胞，成熟的红细胞是没有DNA的。
所以，提鸡血DNA是可以直接裂解的，但是还是建议破裂细胞后加倍蛋白酶消化，而且取样不必太多，个人感觉50ul足够了。
再一个，你说了使用的是肝素钠抗凝剂，你在提的过程中最好要加肝素清除剂，因为肝素对后续实验如PCR有很大影响，有时候基因组提的没问题，但是就是扩不出来东西，个人真是经历，所以给你建议。

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9楼2014-10-01 15:30:33

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