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烨火赤心

铜虫 (小有名气)

[求助] 鸡血DNA提取 已有10人参与

各位 好，我最近要提取鸡血DNA，但血液已经在-20度放置好几个月了，还能用么？另外我用的是肝素钠抗凝管，后来发现提取的血液样品已经有一部分凝血了，如果要用凝血块提DNA除了液氮研磨还有其他的办法么？还有就是鸡血DNA提取出来的正常浓度应该是多少呢？
急急急！！！！！！
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烨火赤心

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1楼 2014-09-24 00:07:24
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就会提核酸

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

1：用力晃动保存管，使凝血部分分离。
2：移取少许到离心管中，离心弃上清。
3：一般 5ul 细胞沉淀可获得不少于 20ug 的 DNA。如果沉淀小于预期，补加样品后再离心弃上清；如果沉淀多于预期，加入少许水，顺势抽打悬浮后，吸出多于的 (预估即可)，再离心弃上清。
4：可以使用任何细胞 DNA 抽提的方法抽提。
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8楼2014-10-01 14:05:40
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Mynameisju

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

鸡血血细胞是有核细胞，即有核酸的细胞，人血基因组提取的是血细胞中的白细胞和一些尚未成熟的有核红细胞，成熟的红细胞是没有DNA的。
所以，提鸡血DNA是可以直接裂解的，但是还是建议破裂细胞后加倍蛋白酶消化，而且取样不必太多，个人感觉50ul足够了。
再一个，你说了使用的是肝素钠抗凝剂，你在提的过程中最好要加肝素清除剂，因为肝素对后续实验如PCR有很大影响，有时候基因组提的没问题，但是就是扩不出来东西，个人真是经历，所以给你建议。
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9楼2014-10-01 15:30:33
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普通回帖

烨火赤心

铜虫 (小有名气)
送红花一朵
没人么？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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2楼2014-09-24 01:02:23
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koujie1986

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
烨火赤心(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-09-29 19:48:21
随便提，以前我用臭了的鸡血能提出来做PCR。
不晓得你用什么方法体DNA，试剂盒？盐酸胍？酚氯仿法？
只要是用蛋白酶裂解的，凝血了用剪刀剪成小块一样可以做
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3楼2014-09-29 15:31:42
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youlinglyw

荣誉版主 (著名写手)

一匡天下

优秀版主

【答案】应助回帖

★
烨火赤心(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-09-29 19:48:56
可以提，没问题。我们放几年的血液提取没啥问题。

凝块就用枪头挑一点，然后反复吹打
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天行健
4楼2014-09-29 16:05:53
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bio_sci

捐助贵宾 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-09-30 12:35:57
注意不好提，鸡血和人血不一样

[ 发自小木虫客户端 ]
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5楼2014-09-29 16:49:28
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602059625

金虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-09-30 12:36:01
哈哈，记得高中生物书上就是用鸡血提dna
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[url=http://ip.WoTuLa.com][img]http://i.WoTuLa.com/note.png?name=填写姓名&say=这里填写您想说的内容。[/img][/url]
6楼2014-09-30 00:05:02
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ECLA

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-09-30 12:36:05
肝素抗凝血DNA基本提不出来。提血液DNA大部分都是EDTA抗凝的。
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7楼2014-09-30 08:52:30
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摩天轮711

新虫 (初入文坛)
渊博震天: 应助指数-1 2019-01-24 20:48:15
如果条件允许的话,最好不要用凝血块,.因为血液凝固之后,纤维蛋白原变成纤维蛋白网罗红细胞,白细胞含量非常低,常规提取法不适应,只能采用专门的凝血块试剂盒（比如BIOG）或许会好些。所以抗凝剂的添加还是必要的,而且要用枸橼酸钠抗凝，肝素是PCR的强烈抑制剂,如果你要做PCR的话,很容易扩增失败。
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10楼2018-12-13 14:54:23
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