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ufoloveshe

铜虫 (小有名气)

[求助] 镍柱纯化蛋白,遇到史上最顽固的杂蛋白 已有6人参与

做了很久的镍离子亲和层析纯化蛋白,遇到了史上最顽固的杂蛋白,怎么除都除不掉。而且浓缩后观察,貌似还有增多的趋势,实在令人费解。咪唑浓度设计梯度,增加到50mM时候就有目的蛋白析出,因此洗杂缓冲液一直设定在25mM,但杂蛋白貌似和镍柱结合的很紧密,洗杂缓冲液洗不下来,最后都和目的蛋白一同下来了。请大神指教。

镍柱纯化蛋白,遇到史上最顽固的杂蛋白
CYD浓缩后:M,原,浓缩管水洗液,缓,缓洗,25,25水洗,100,100水洗,胍2 (1).jpg


镍柱纯化蛋白,遇到史上最顽固的杂蛋白-1
TPK浓缩后:M,胍前,缓,25,100,胍2,M,CYD25,CYD-EDTA,CYD溜总 (1).jpg
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抱怨是你应有的惩罚
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dongmings

木虫之王 (文学泰斗)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-09-18 18:27:33
杂蛋白可能是与柱子非特异性结合,也可能是与你的目的蛋白结合的。如果是与柱子结合的,用分子筛能除掉一部分,如果是与蛋白结合的,估计分子筛就不起作用了,你可以试试离子交换柱。
7楼2014-09-17 15:55:15
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查看全部 24 个回答

lpzl

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
楼主解决了么??
Start_everyday_with_a_new_hope,_leave_bad_memories...
2楼2014-09-17 09:14:20
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忘记将来

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
那你用40mM或者45mM洗呀,
4楼2014-09-17 13:03:06
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树在田野

金虫 (小有名气)

50洗啊

[ 发自小木虫客户端 ]
好好学习
5楼2014-09-17 13:35:56
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