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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 镍柱纯化蛋白，遇到史上最顽固的杂蛋白
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ufoloveshe

铜虫 (小有名气)

[求助] 镍柱纯化蛋白，遇到史上最顽固的杂蛋白 已有6人参与

做了很久的镍离子亲和层析纯化蛋白，遇到了史上最顽固的杂蛋白，怎么除都除不掉。而且浓缩后观察，貌似还有增多的趋势，实在令人费解。咪唑浓度设计梯度，增加到50mM时候就有目的蛋白析出，因此洗杂缓冲液一直设定在25mM，但杂蛋白貌似和镍柱结合的很紧密，洗杂缓冲液洗不下来，最后都和目的蛋白一同下来了。请大神指教。

镍柱纯化蛋白，遇到史上最顽固的杂蛋白
CYD浓缩后：M,原，浓缩管水洗液，缓，缓洗，25,25水洗，100,100水洗，胍2 (1).jpg


镍柱纯化蛋白，遇到史上最顽固的杂蛋白-1
TPK浓缩后：M,胍前，缓，25,100，胍2，M，CYD25，CYD-EDTA,CYD溜总 (1).jpg
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抱怨是你应有的惩罚
1楼 2014-09-16 09:08:59
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树在田野

金虫 (小有名气)
50洗啊

[ 发自小木虫客户端 ]
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好好学习
5楼2014-09-17 13:35:56
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lpzl

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
楼主解决了么？？
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Start_everyday_with_a_new_hope,_leave_bad_memories...
2楼2014-09-17 09:14:20
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忘记将来

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
那你用40mM或者45mM洗呀，
赞一下 回复此楼
4楼2014-09-17 13:03:06
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zhenxiangkai

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-09-18 18:27:26
你可以尝试一下把填料的体积弄小点，或者里面加点甘油，TRIX-100 等减少非特异性聚集的东东，当然，你的还是不错的，后续还要过离子柱吗？分子筛？
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2014-09-17 15:21:21
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