| 查看: 1413 | 回复: 4 | ||
pursuream至尊木虫 (正式写手)
|
[求助]
镍柱纯化后的蛋白，上下翻转混匀时易聚沉，是容易氧化吗？ 已有1人参与
|
|
如题，我做的蛋白280个氨基酸，其中7个Cys， 镍柱纯化后纯度不错，但是很不稳定。为了防止蛋白浓缩前就沉在浓缩管中，我会在15ml管中预混合几管蛋白，如果小心操作，用移液枪吹吸混匀，最高可以浓缩到5mg/ml左右；如果上下翻转混匀，就会在管中迅速沉淀，伴有大量泡沫（絮状沉淀会挂在气泡上）而吹吸混合几乎不产生泡沫。 基于这个现象，我分析是Cys容易氧化的过。但师姐说不大可能，因为buffer中已经加了10mM的β-me，Cys也不会氧化的那么快。 各位觉得是什么原因呢？ 如果这个蛋白确实是极不耐氧，在进一步的纯化中，有什么提高稳定性的方案么？除了过完镍柱后补加还原剂~ 另外，此蛋白是个细菌转录因子，不稳定可能和DNA结合区域有关，有没有什么稳定DNA结合区的buffer？（类似于《从纯化到星辰》中提到的稳定CDC6用的磷酸+谷氨酸buffer） |
回复此楼» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有202人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 镍柱纯化蛋白，遇到史上最顽固的杂蛋白
已经有23人回复
2楼2012-07-09 20:00:41
pursuream
至尊木虫 (正式写手)
- 应助: 6 (幼儿园)
- 金币: 10993.1
- 散金: 10
- 红花: 5
- 帖子: 651
- 在线: 433.8小时
- 虫号: 1226621
- 注册: 2011-03-09
- 性别: GG
- 专业: 基因组学
3楼2012-07-10 12:30:57
梦在农大
银虫 (正式写手)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 1586.6
- 散金: 25
- 红花: 1
- 帖子: 345
- 在线: 78.8小时
- 虫号: 2416586
- 注册: 2013-04-13
- 专业: 普通教育学
4楼2014-03-25 10:24:31
pursuream
至尊木虫 (正式写手)
- 应助: 6 (幼儿园)
- 金币: 10993.1
- 散金: 10
- 红花: 5
- 帖子: 651
- 在线: 433.8小时
- 虫号: 1226621
- 注册: 2011-03-09
- 性别: GG
- 专业: 基因组学
5楼2014-03-31 16:04:13
