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pursuream至尊木虫 (正式写手)
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镍柱纯化后的蛋白，上下翻转混匀时易聚沉，是容易氧化吗？ 已有1人参与
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如题，我做的蛋白280个氨基酸，其中7个Cys， 镍柱纯化后纯度不错，但是很不稳定。为了防止蛋白浓缩前就沉在浓缩管中，我会在15ml管中预混合几管蛋白，如果小心操作，用移液枪吹吸混匀，最高可以浓缩到5mg/ml左右；如果上下翻转混匀，就会在管中迅速沉淀，伴有大量泡沫（絮状沉淀会挂在气泡上）而吹吸混合几乎不产生泡沫。 基于这个现象，我分析是Cys容易氧化的过。但师姐说不大可能，因为buffer中已经加了10mM的β-me，Cys也不会氧化的那么快。 各位觉得是什么原因呢？ 如果这个蛋白确实是极不耐氧，在进一步的纯化中，有什么提高稳定性的方案么？除了过完镍柱后补加还原剂~ 另外，此蛋白是个细菌转录因子，不稳定可能和DNA结合区域有关，有没有什么稳定DNA结合区的buffer？（类似于《从纯化到星辰》中提到的稳定CDC6用的磷酸+谷氨酸buffer） |
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